Практический курс химической и ферментативной кинетики - Березин И.В.
Скачать (прямая ссылка):
Вычислить значения рК групп активного центра свободного фермента, контролирующих скорость реакции.
Таблица 14
pH-Зависимость ацилирования а-химотрипсина п-нитрофенилацетатом. Условия опыта: 25° С; 1,6% ацетонитрила
pH k?!Kg , М---i-сек---1 pH k?(K%, М---i-сек---1
4,18 14,6 7,21 2850
5,08 78,5 7,46 3190
5,38 186 7,66 3000
5,91 487 7,83 3410
6,47 1120 8,13 3330
6,58 1350 8,71 2660
6,74 1970 8,73 1850
6,83 1850 9,21 1810
6,97 2350 9,38 1420
7,09 2490 9,98 670
10-15. В таблице 15 приведена pH-зависимость гидролиза фе-нилового эфира а-1М-бензилоксикарбовил-Ь-лизина, катализируемо-
го стрептококковой протеиназой [10]. Определить значения рК ионогенных групп свободной формы фермента и фермент-субстратного комплекса, контролирующих реакцию гидролиза.
Таблица 15
pH-Зависимость гидролиза фенилового эфира а-]Ч-бензилоксикарбонил-Ь-лизина, катализируемого стрептококковой протеиназой. Условия опыта: 25° С; ионная сила 0,2 (буферные растворы); 3,17% ацетонитрила;
[SIo = (0,293 — 1,17)• 10~3М; [Е|0 = (0,641 — 1,80)• 10-8М
pH *кат> сек~1
3,42 45,4 15,20
3,71 60,8 11,76
4,04 94,1 12,38
4,33 114,5 9,49
4,55 142.6 8,33
4,74 150,5 8,02
5,00 163,2 7,01
5,53 176,1 6,67
6,21 182,4 6,64
6,73 178,0 6,05
6,99 189,5 6,37
7,25 173,7 5,88
10-16. В таблице 16 приведена pH-зависимость гидролиза n-нитрифенилтиолацетата, катализируемого а-химотрипсином [11]. Определить значения рК ионогенных групп свободной формы фермента, принимающих участие в реакции.
Таблица 16
pH-Зависимость гидролиза n-нитрофенилтиолацетата, катализируемого а-химотрипсином. Условия опыта: 25° С; ионная сила 0,005М (буферные растворы);
1,6% ацетонитрила; [S]0 = 2,60-10-5М;
[Е]о = 5,99-10-5М
pH ki 1К§, М---l-сек---I
4,47 40
4,93 117
5,43 278
5,80 560
6,48 1360
7,15 2500
7,41 2340
7,52 2670
7,69 2С70
8,20 3000
8,64 2570
8,98 2080
9,65 1140
10-17. В таблице 17 приведена pH-зависимость гидролиза амида Ы-ацетил-Ь-фенилаланил-Ь-тирозина, катализируемого пепсином [12]. Определить значения рК групп активного центра свободной формы фермента, принимающих участие в реакции.
Таблица 17
pH-Зависимость гидролиза амида М-ацетил-Ь-фенилаланил-Ь-тирозина, катализируемого пепсином. Условия опыта: 35° С; 3% метаиола;
[SJ0 = (0,85 — 8,49)• 10~4М; [Е]0 = (1,39 — 2,21)-10-5М
pH ftKaT-10!- ceK_1 *т(каж)’103'М
0,50 0,99 1,67
0,70 1,64 2,28
1,11 3,48 2,34
1,50 5,05 2,36
1,95 7,80 2,41
2,50 5,59 1,88
3,15 7,02 2,33
4,20 4,70 2,54
4,68 1,82 1,87
4,70 2,07 1,68
4,97 3,59 4,47
5,43 0,76 1,94
5,44 0,24 0,72
10-18. В таблице 18 приведена рН-завнсимость гидролиза фе-нилового эфира Ы-бензилоксикарбонил-Ь-аланина, катализируемого папаином [10]. Определить значения рК ионогенных групп свободной формы фермента, контролирующих реакцию.
Таблица 18
Влияние pH на гидролиз фенилового эфира 1^-бензилоксикарбонил-Ь-аланина, катализируемый папаином. Условия опыта: 25° С; ионная сила 0,2М;
3,17% ацетонитрила; [SJ0 = 1,43-10-5М; [Е]„ = 7,43-10~8IVi
pH *кат -10® pH кат 1Пв
к * К *
Л77! (каж) л т (каж)
М--- i-сек---1 М*---1’ сек---1
3,42 1,33 6,21 9,15
3,71 3,10 6,48 9,64
4,04 5,35 6,73 9,53
4,33 7,34 6,99 9,65
4,55 8,09 7,40 8,74
4,74 8,90 7,73 7,52
5,00 9,12 8,00 5,69
5,39 9,73 8,19 4,15
5,53 9,65 8,65 2,20
10-19. Гидролиз метилового эфира Ы-бензоил-Ь-аланина, катализируемый трипсином, протекает по трехстадийному механизму, причем для этой реакции скорость-лимитирующей стадией является ацилирование. На основании данных pH-зависимости реакции гидролиза (табл. 19) вычислить значения рК ионогенных групп свободного фермента и кинетически существенных промежуточных соединений фермента и предложить схему pH-зависимости реакции.
