Практический курс химической и ферментативной кинетики - Березин И.В.
Скачать (прямая ссылка):
pH *кат> сек-* pH *кат’ сек"‘
3,15 11,9 4,60 40,9
3,42 21,7 5,32 40,1
3,47 22,2 5,51 43,5
3,70 27,4 5,58 44,0
3,77 29,3 6,00 43,2
3,96 33,2 6,14 44,4
4,01 36,9 6,92 44,5
4,57 37,2
10-8/Скорость необратимого ингибирования папаина L-1-хлор-3-тозиламидо-4-фенил-2-бутаноном зависит от pH среды [6]. На основании данных табл. 8 определить рК ионогенной группы, контролирующей инактивацию фермента, а тгкже найти истинное значение константы скорости инактивации.
Таблица 8
рН-Завнсимость константы скорости инактивации папаина хлоркетоном. Условия опыта: 25° С; ионная сила 0,1М (буферные растворы); 3,2% ацетонитрила; [EJ0=2,9-10-6M
pH k , М 1-сек--->
инакт’
6,56 20,0
7,05 67,9
7,55 176
8,08 448
8,30 554
8,61 755
9,02 981
9,60 1020
10-9. pH-Зависимость гидролиза п-нитроанилида Ы-бензоил-Ь-аргинина, катализируемого папаином, имеет вид колоколообразной
кривой [7]. Исходя из данных табл. 9, вычислить значения рК ионогенных групп свободного фермента, принимающих участие в реакции.
Таблица 9
Влияние pH иа гидролиз гс-нитроанилида 1^-бензоил-Ь-аргинина, катализируемый папаином.
Условия опыта: 25° С; ионная сила 0,ЗМ;
[SJo = (0,40 — 2,00)- 10-3М;
[Е]0 = (4,13 — 8,26)- 10-7М
pH *кат- сек-1 Кт (каж)'103' М
3,98 0,29 4,07
4,50 0,47 3,23
4,99 0,72 3,29
5,49 0,76 3,17
5,96 0,74 2,86
6,49 0,73 2,95
7,01 0,69 3,00
7,48 0,63 3,18
7,65 0,63 3,59
8,28 0,53 5,06
8,51 0,45 4,39
8,82 0,40 5,47
8,91 0,34 5,76
9,25 0,21 6,06
10-10. В таблице 10 приведена pH-зависимость гидролиза амида Ы-ацетил-Ь-фенилаланина, катализируемого а-химотрипсином [5]. Найти значения рК ионогеиных групп фермент-субстратного комплекса, контролирующих ферментативную реакцию.
Таблица 10
Влияние pH на кинетику гидролиза амида ]М-ацетил-Ь-фенилалаиина, катализируемого а-химотрипсином. Условия опыта: 25° С;
[S]0= (0,35—3,5) • 10-2М; [Е]0= (2,0—5,0) • 10~5М
рн *кат"105’ сек-1
5,71 0,61
6,34 1,4
6,87 3,6
7,62 4,3
7,92 4,6
8,49 3,9
8,81 3,9
9,05 2,8
9,08 2,4
9,18 3,0
9,35 2,6
9,95 1,2
10-11. В таблице 11 приведена pH-зависимость максимальной скорости гидролиза п-нитрофенилового эфира н-масляной кислоты, катализируемого кишечной эстеразой [8]. Определить значения рК ионогенных групп фермент-субстратного комплекса, контролирующих скорость реакции.
Таблица И
Влияние pH на максимальную скорость гидролиза гс-нитрофенилбутирата, катализируемого кишечной эстеразой
pH V •10е. моль
шах мин мг белка
4,5 24,2
5,2 73,3
5,5 126,5
6,0 166,2
6,5 235,6
7,0 281,9
7,3 257,2
7,5 230,1
8,0 160,6
8,5 61,3
9,0 21,6
10-12. В таблице 12 приведена pH-зависимость гидролиза амида Ы-ацетил-Ь-триптофана, катализируемого а-химотрипсином [5]. Определить значения рК групп фермент-субстратного комплекса, принимающих участие в катализе.
Таблица 12
Влияние pH на гидролиз амида М-ацетил-Ь-триптофана, катализируемого а-химотрипсином. Условия опыта: 25° С;
IS ] о = (0,71 -12,7)- 10-3М;
[ Е J о = (1,0—2,5) - 10_4М
pH *Кат-10'1-
5,73 0,249
6,72 1,44
7,09 2,70
7,73 4,10
8,00 4,37
8,66 3,40
9,17 1,42
9,70 0,974
10-13. В таблице 13 приведена pH-зависимость кинетических параметров гидролиза этилового эфира Ы-бензоил-Ь-аргинина, ка-
тализируемого клострипаином [9]. Определить величины рК ионогенных групп активного центра свободного фермента и фермент-еубстратного комплекса и предложить схему pH-зависимости реакции.
Таблица 13
Влияние pH на гидполиз этилового эфира
N-бeнзoил-L-apгининa, катализируемый клострипаином. Условия
опыта: 25° С; ионная сила 0,1М (КС1);
[EJ0= (0,6—1,2)10-7М; [S]0 = (0,10—0,75) ¦ 10~3М
pH *кат- сек-1 ^mW)‘103'M
5,50 83 4,80
6,00 79 0,94
6,88 89 0,39
7,37 90 0,41
7,89 80 0,40
8,50 47 0,42
8,95 15,7 0,35
9,39 6,6 0,31
10-14. В таблице 14 приведена pH-зависимость константы скорости реакции второго порядка ацилирозания а-химотрипсина п-нитрофенилацетатом [5].
