Практический курс химической и ферментативной кинетики - Березин И.В.
Скачать (прямая ссылка):
0,77 3,64 2,28 1,68
0,67 3,34 2,08 1,50
7-6. Определить значения индивидуальных констант k2, k3 и Ks для гидролиза метилового эфира N-ацетил-Ь-валина, катализируемого а-химотрипсином в присутствии дополнительного нуклеофильного агента, 1,4-бутандиола (табл. 6).
Таблица 6
Влияние Г,4-бутандиола (N) на кинетику гидролиза метилового эфира Ы-ацетил-Ь-валина, катализируемого а-химотрипсином. Условии опыта: pH 7,8; 25° С; ионная сила 0,!М (КС!); [Е]0 = 3,8 !0-5М
|SJ0, м гМО6, М-сек 1
(N] = 0 N = 0,33 М N = 0,55 М
0.2С0 4,57
0,193 --- 3,68 ---
0,189 --- 3,03
0,1-4 3,83 3,01 2,47
0,091 3,32 2,60 2,03
0,071 2,95 2,16 1,68
0.Г6П 2,70 1,97 1,53
7-7. Определить значения индивидуальных констант гидролиза метилового эфира 1М-ацетил-Ь-фенилаланина, катализируемого трипсином в присутствии метанола, являющегося дополнительным нуклеофильным агентом (табл. 7).
Таблица 7
Влияние метанола на кинетику гидролиза метилового эфира
N-ацетил-L-фени л аланина, катализируемого трипсином.
Условия опыта: pH 7,8 ; 25° С; ионная сила 0,1М (КС1);
IЕ1 о = 1,41 • 10_6М
1S]„-103, м V' 10е, М-сек 1
[СНзОН] = 0 [СН3ОН] = 0,5 М 1СН3ОН] = 1 м
10,0 3,26 1,95 1,39
8,00 2,80 1,67 1,19
6,67 2,47 1,47 1,05
5,55 2,16 1,28 0,915
5,00 2,00 1,18 0,843
7-8. В таблице 8 приведены кинетические данные для гидролиза метилового эфира N-бензоилглйцина, катализируемого а-химотрип-
сином, в присутствии дополнительного нуклеофильного агента, 1,4-бутандиола [2]. Определить значения индивидуальных констант k2, к$ и Ks ферментативной реакции.
Таблица 8
Влияние 1,4-бутандиола (N) на кинетику гидролиза метилгиппурата, катализируемого а-химотрипсином.
Условия опыта: pH 7,8; 25° С; ионная сила 0,1М (NaCl);
[Е]а = 3,87 • 10~6М
[S]0.ios, м V107, М-сек 1
[N] = 0 [N] = 0,11 М [N] = 0,22 М
4,00 11,05 6,72 4,72
2,00 9,98 6,05 4,25
1,33 9,28 5,50 3,85
1,00 8,54 5,05 3,52
0,80 7.94 4,65 3,25
7-9. При изучении кинетики сольволиза метилгидроциннамата, катализируемого а-химотрипсином в смеси воды с метанолом, выступающим в качестве дополнительного нуклеофильного агента, определяли зависимость максимальной скорости образования гидрокоричной кислоты (продукт Р2 на схеме 7.12) от концентрации метанола [1]. Исходя из данных табл. 9, определить значения констант скоростей k2, /г3 и /г4 (см. схему 7.12), если для ферментативного гидролиза метилгидроциннамата отношение k2lks, определенное из независимого эксперимента, равно 2,5.
Таблица 9
Влияние метанола на максимальную скорость гидролиза метилгидроциннамата, катализируемого а-химотрипсином. Условия опыта: pH 7,8; 25° С;
1Е]0 = 8,810-7М
1СН3ОН], м 1^-Ю7. М-сек 1
0 1,67
0,12 1,43
0,50 0,80
1,0 0,53
2,0 0,30
3,0 0,22
7-10. Определить значения индивидуальных констант гидролиза метилового эфира Ы-ацетил-Ь-норвалина, катализируемого а-химотрипсином в присутствии метанола, выступающего в роли дополнительного нуклеофильного агента (табл. 10).
Влияние метанола на значения кинетических параметров гидролиза метилового эфира М-ацетил-Ь-норвалина, катализируемого а-химотрипсином. Условия опыта: pH 7,8; 25°С; ионная сила 0,1М (КС1); [Е]0 = 2,79-10~7М
1СН„ОН], м *кат- сек"' Кт(каж)-Ю3, М
0 7,97 1,43
0,5 7,36 2,22
1,0 6,60 2,94
1,5 6,14 3,45
7-11. В работе [8] изучали сольволиз ряда производных глута-ровой кислоты, катализируемый ш-амидазой в присутствии дополнительного нуклеофильного агента, гидроксиламина. В табл. 11 приведены отношения скоростей гидроксиламинолиза к скорости гидролиза для исследованного ряда субстратов при нескольких концентрациях гидроксиламина. Показать, в пользу двух- или трехстадийного механизма гидролиза свидетельствуют полученные данные.
Таблица 11
Влияние концентрации гидроксиламина на отношение скоростей гидроксиламинолиза и гидролиза для производных глутаровой кислоты при катализе ш-амидазой. Условия опыта: pH 7,0; 30° С; 0,05М фосфатный буфер; [Е]с = 2,8-10-2 мг/мл
[NHSOH]-103, М ^NH.OH/^HjO
ыетилглутарат глутарамат л-нтрофенилглутарат
1,0 1,05 1,10 1,17
1,5 1,60 1,70 1,65
2,0 2,20 2,17 2,25
