Практический курс химической и ферментативной кинетики - Березин И.В.
Скачать (прямая ссылка):
kj I “ 7 — а Т — “ ' [I] '
/
Так как для ингибирования а-хтютрипсина эриохромом черным Т величина Ктккаж) не изменяется в присутствии ингибитора, то линеаризация экспериментальных данных в координатах
Ik1 1
1 ккат j
_ \^кат } га.
где [I] —концентрация мономера, рассчитанная с помощью соотношения (7.46), позволяет найти значения К\ и у/а (рис. 81). Наконец, из рассмотрения выражения
(7.45) можно заключить, что величина Кт(каж) не будет зависеть от концентрации ингибитора только в случае выполнения равенств у/а= = 6/р, а= 1, р=1.
Ответ: а=1; р= I; у=0,3; 8 = = 0,3; Кг= 1,М0-Б М; k3 = 135 сек-1.
7-16. Для вывода уравнения скорости установления равновесия в системе (7.19) запишем выражение для скорости накопления ацил-фермента
Рис. 81. Обработка кинетических данных по неполному неконкурентному ннгибированию эриохромом черным Т гидролиза этилового эфира Ы-ацетил-Ь-тирозина, катализируемого а-химотрипсином
d [ЕА]
dt
А_з [ЕР] - *3 [ЕА], (7-48>
уравнение материального баланса по ферменту
[Е]0 = [Е] + [ЕР] + [ЕА] (7.49)
и выражение для константы равновесия в системе в начальный период реакции
Р-50)
Из соотношений (7.49), (7.50) найдем выражение для текущей концентрации свободной формы фермента
r , [Е]0— [ЕА]
FI - JP]_ '
+ /Ср
Дифференцируя выражение (7.51) по времени, получаем d [Е] К? tf [ЕЛ]
(7.51)
dt
AfP + [P] ' dt •
Подставляя выражение (7.48) в (7.52) и комбинируя полученное выражение с соотношениями (7.50), (7.51), получаем
МСР[Е]„ /. ft_,[P]
^ [Е1
dt
КР + [Р]
)[Е].
(7.53)
Интегрирование уравнения (7.53) при начальных условиях [Е] = [Е]0 при t = 0 приводит к соотношению
[Е]-[Е]р.,гн е_*9фф(> (754)
[Е]о ¦ [Е]
1ра е н
где эффективная константа скорости первого порядка, характеш-зующая скорость установления равновесия, равна
<7'55>
и [Е]Равн — равновесная концентрация свободной формы фермента (при t —» оо).
1) Из выражения (7.54) следует, что величину кэфф можно найти линеаризацией экспериментальных данных в координатах Л [Е] —[E]paDH ^
(In ^ -----,tj. Далее, используя соотношение (7.55) и извест-
ные значения констант kb и Кт>, можно нёйти величину к~ъ.
2) Линеаризация соотношения (7.55) в виде
1 =_L . кр 1
^Эфф " k3 h—s k—3 [P]'
позволяет определить значения кокстёнт /г_3 и Кр из тангенса угла наклона и точки пересечения прямой в координатах (1/(Л;эфф + Л;3), 1/[Р]). Для использования этого метода необходимо предварительно определить величину k3 из независимого эксперимента.
Ответ-: ?_3 = 2,6-10-2 сек-1.
ЛИТЕРАТУРА
1. В е n d е г М. L., С 1 е m е n t G. Е„ G u n t е г С. R., К е z d у F. J. „ J. Amer, Chem. Soc.“, 86, 3697, 1S64.
2 Berezin I. V., Kazanskaya N. F., Klyosov A. A. „FEBS Letters", 15, 121, 1971.
3. Outfreund H., Hammond B. R. „Biochem. J.“, 73, 526, 1959.
4. Kortt A. A., Liu T.-Y. „Biochemistry", 12, 328, 1973.
5 Березин И. В., Билль X., Мартинек К., Яцимирский А. К. ДАН СССР, 179, 214, 1S68.
6. Б е р е з н н И. В., Мартинек К. В сб.: „Структура и функция фермен-
тов", вып. 1. Изд-во МГУ, 1972, стр. 20.
7. Martin R. В., Niemann С. „J. Amer. Chem. Soc.“, 80, 1481, 1958.
8. Hersh L. В. „Biochemistry", II, 2251, 1972.
9. Henry A. C„ Kirsch J. F. „Biochemistry", 6, 3536, 1967.
10. Hlnberg I., Laidler K. J. „Can. J. Biochem", 50, 1360, 1972.
11 К e z d у F J., Clement G. E., В e n d e r M. L. „ J. Amer. Chem. See.",
86, 3690, 1964.
ПРИМЕНЕНИЕ ИНТЕГРАЛЬНОЙ ФОРМЫ УРАВНЕНИЯ СКОРОСТИ ДЛЯ КИНЕТИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ФЕРМЕНТАТИВНЫХ РЕАКЦИЙ
§ 1. Интегральный анализ кинетики действия ферментов
Обработка кинетических данных ферментативных реакций может быть проведена как с использованием начальных скоростей (см. гл. 5—7), так и с использованием временного хсда реакции, применяя интегральную форму кинетического уравнения скорости.
В своей дифференциальной форме уравнение Михаэллеа-Мен-тен (8.1) справедливо для двух- и многостадийных стационарных ферментативных процессов при условии [S] [Е] о
d [S] _ ____Vт [S] ..
dt ' Кт («а») + [S] ' ' '
