Практический курс химической и ферментативной кинетики - Березин И.В.
Скачать (прямая ссылка):
Время, мин [ Р]-1С», М
0,4 0,28
0,9 0,67
1.3 0,96
1,8 1,34
2,7 1,85
3,3 2.36
3,9 2,74
4,6 3,22
5,2 3,54
5,8 3,92
6,3 4,30
7,0 4 58
7.7 4,85
оо 4,95
8-6. В таблице 5 приведена кинетика накопления «-нитрофенола в реакции гидролиза n-нитрофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой [6]. Определить значения Ут и /Ст(каж) фер ментативной реакции.
8-7. В таблице 6 приведены кинетические данные по изучению реакции гидролиза мочевины, катализируемой уреазой, полученные с помощью конд} ктометрического метода [5] Определить значения Vm и Кт(каж) ферментативной реакции.
Кинетика накопления я-нитрофенола в реакции гидролиза я-нитрофенилфосфата, катализируемого щелочной фосфатазой. Условия опыта: pH 8,0; 25°С; 1М трис-буфер; [S]0 = 5,1 ¦ 10~3М
Время, мин. Р-103, М
5 0,171
10 0,466
20 1,16
30 1,78
40 2,36
50 2,90
6С 3,31
80 3,95
100 4,36
120 4,66
150 4,88
180 5,00
ОО 5,10
Таблица 6
Зависимость изменения проводимости раствора
(До) от времени гидролиза мочевины,
катализируемого уреазой. Условия опыта: pH 8,0;
37° С; 0,01М трис-буфер; [ S ] о = 110-3М
Время, сек Ас* 10е, ОМ 1 ¦ см 1
10 40
20 62
30 77
60 110
90 130
120 140
150 147
180 149
оо 150
8-8. Анализируя полную кинетическую кривую гидролиза гип-пурилфенилглицина, катализируемого карбопсипепт^дазой, авторы [7] получили отрицательные значения &кат и Кт(кату Дать объяснение полученным результатам.
8-9. В таблице 7 приведены кинетические данные для гидролиза бромацетил-ОЬ-фениллактата, катализируемого карбоксипеп-тидазой [7] . Найти значение константы конкурентного ингибирования продуктом реакции, если значения kKaT и Кт(каж), определенные из начальных скоростей ферментативной реакции, равны 57,4 сек-1 и 1,6 • 10-3 М соответственно.
Кинетика накопления продукта гидролиза бромацетил-БЬ-фениллактата, катализируемого карбокенпептидазой. Условия опыта: pH 7,5;
25° С; [S]0 = 7,3- 10~3М; |Е|0 = 5,68-10~7М
Время, сек |Р]-103, м
96 2,63
144 3,29
228 4,29
324 5, СО
624 6,27
834 6,73
1146 7,20
8-10. Предложить метод определения кинетических параметров ферментативных реакций, основанный на определении площади под кинетической кривой в координатах ([S], t).
8-11. Предложить аналитический метод определения константы Михаэлиса, исходя из уравнения касательной к кинетической кривой в начальный момент времени и иьтегральной формы уравнения кинетической кривой ферментативной реакции.
8-12. Доказать, что прямая, проведенная из начала координат
(Щ, ~ In r PbJ с угловым коэффициентом численно рав-\ t t loj0 I* \J о о
ным [S]0, пересекает другую прямую, описываемую уравнением (8.3)
в точке, соответствующей начальному времени реакции.
8-13. Гидролиз бензилпенициллина, катализируемый пеницил-линамидазой, ингибируется пpoдvктoм реакции, фенилуксусной кислотой. В табл. 8 приведены значения констант Михаэлиса, рас-
Таблица 8
Зависимость кажущейся констаиты Михаэлиса от начальной концентрации субстрата для гидролиза бензилпенициллина, катализируемого пенициллинамидазой Условия опыта: pH 7,5; 25е С; ионная сила
0,1М (КС1); [Е|0 = 2,3-10-7М
[ S]o.10*, М ^(каЖ)-,05'М
0,70 1,26
0,90 1,49
1,20 1,99
2,30 3,43
3.50 4,80
4,70 5,30
7,00 11,10
9,40 11,60
11,70 15,50
считанные из анализа полной кинетической кривой, при различных значениях начальной концентрации бензилпенициллина. Определить значения кинетических параметров и константы ингибирования фермента фенилуксусной кислотой, если величина Vm, определенная с помощью интегрального метода анализа, равна 4-10"7 М-сек-1 при всех значениях [S]0.
