Практический курс химической и ферментативной кинетики - Березин И.В.
Скачать (прямая ссылка):
Таблица 1
Зависимость концентрации продукта, образовавшегося через 1 ч после начала ферментативного гидролиза амида К-ацетил-Ь-гексагидрофенилаланина, от концентрации субстрата. Условия опыта: pH 7,9; 23° С; начальная концентрация а-химотрипсина 6,14 • 10_5М
[ S]o10=>, м [р1ее мин ->о3. м
1,00 1,85
1,24 2,26
1,25 2,35
1,43 2,44
1,50 2,58
1,67 2,84
2,00 3,13
2,22 3,46
2,55 3,62
3,00 3,90
3,50 4,15
4,01 4,51
\Jwp В таблице 2 приведены кинетические данные для гидролиза метилового эфира Ы-ацетил-Ь-фенилаланил-Ь-лизина, катализируемого трипсином в присутствии 1-метил-2-аминоиндола [2]. Определить значения кинетических параметров и константу ингибирования ферментативной реакции.
Таблица 2
Кинетика расходования субстрата в реакции гидролиза метилового эфира К-ацетил-Ь-фенилаланил-С-лизина, катализируемого трипсином, в присутствии 1-метил-2-аминоиндола. Концентрация субстрата выражена в см диаграммного листа самописца, так что перемещение пера самописца на 1 см соответствует изменению концентрации субстрата на 3,74-10_5М.
Условия опыта: pH 7,8; 25° С; ионная сила 0,1М (СаС12); [Е]0 = 1,82-10-8М
Время, сек [S], см
[I] = 0 [I] = 1,46-10---3 М [I] = 1,84-10---3 М [I] 3,25-10“3 М
0 15,4 16,9 16,8 18,0
30 13,1 14,9 15,2 16,2
60 11,1 13,0 13,2 14,5
90 9,0 11,2 11,2 12,8
120 7,1 9,4 9,4 11,2
150 5,2 7,7 7,6 9,7
180 3,6 6,1 --- 8,2
195 --- --- 5,6 ---
210 2,1 4,6 --- 6,8
225 --- --- 4,6 _
240 1,1 3,4 --- 5,6
255 - 3,3 _
270 0,4 2,4 --- 4,5
285 --- 2,2 ---
300 - 1,6 --- 3,5
315 - --- 1,5 ---.
330 - 1,0 --- 2,6
345 - - 0,9 ---
360 - 0,5 --- 2,0
390 - --- --- 1,4
8-4. В таблице 3 приведены кинетические данные для гидролиза этилового эфира Й-ацетил-Ь-тироглша, катализируемого а-химотрипсином в присутствии конкурентного ингибитора, метилового эфира М-ацетил-Б-фенилаланил-Ь-аланина. Определить значение константы ингибирования фермента DD-дипептидом, если начальная концентрация субстрата и начальное время реакции неизвестны. Определение концентрации непрореагировавшего субстрата в ходе ферментативной реакции проводилось в каждом случае через равные промежутки времени.
8-5. Кинетика дезаминирования аденозина, катализируемого аденозиндезаминазой, изучалась в работе [5] кондуктометриче-ским методом (табл. 4). На основании данных табл. 4 опредепить значения Vm и Кт(каж) ферментативной реакции.
Зависимость концентраций субстрата (в уел. ед.), определяемых в процессе ферментативной реакции через одинаковые промежутки времени, от концентрации конкурентного ингибитора. Условия опыта: pH 7,8; 25° С; ионная сила 0,1М (КС1)
[1] = о [I] = 2,8-10-3 М [I] -7,3-10---3 М [I] =0 [I] - 2,8-10“3 М [I] - 7,3-10---3 М
18,2 16,9 [8,9 6,5 4,8 8,1
16,4 15,2 17,2 5,2 3,7 6,8
14,5 13,4 15,5 4,0 2,8 5,7
12,7 11,7 13,9 3,0 2,0 4,6
11,0 10,1 12,3 2,1 1,5 3,5
9,4 8,7 10,9 1,4 2,9
7,9 5,9 9,5 1.0 2,3
Таблица 4
Кинетика накопления продукта дезаминирования аденозина, катализируемого аденозиндезаминазой. Условия опыта: pH 6,5; 37° С; [S]0 = 4,95- 10-3М
