Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка):
на с индикатором таким образом, чтобы при наличии комплексообразования D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина с ионом металла большая часть ионов была связана с пептидом. Из представленных в табл. 4.4 данных видно, что избыток D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина в среде инкубации не ведет к изменению поглощения растворов.
Таблица 4.4
Поглощение комплексов ионов металлов с индикаторами (D) в присутствии 2 мМ D-Ala?, D-Leu^ -энкефалина (1) v л fv • hicymcmeue (II) в буфере Г при 37° С
....... Индикатор Л, I* II*1" *** Концентрация
*'ЮН нМ KInd ионов, дейст
металла вующая на
связывание
D-Ala2, D-Leu5-
гшкефалина
Са2^~, 25 мкМ Арсеназо-Ш, 50 мкМ 655 0,16 0,17 5-Ю-5 1-3 мМ
К1п2+, 20 мкМ Арсеназо-Ш, 50 мкМ 622 0,361 0,367 10~5 0,05-00,1 мМ
La3-!", 20 мкМ Арсеназо-Ш, 50 мкМ 611 0,577 0,589 10-5 0,1-0,5 мМ
Gd3+. 15 мкМ Арсеназо-Ш, 80 мкМ 661 0,431 0,435 10~5 0,001-0,01 мМ
Zn2-^, 20 мкМ Цинкон, 100 мкМ 625 0,409 0,412 10-6-10-7 0.005-0,01 мМ
Ni2+. 20 мкМ Цинкон, 100 мкМ 660 0,214 0,209 10-4-10-5 0,001-0,005 мМ
Примечание. * — в кювете сравнения - индикатор, ** - в кювете сравнения - индикатор + энкефалин, *** - Kjncj - оценочная константа нестойкости комплекса индикатора с ионом металла, М.
Полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что при концентрациях ионов, которые оказывают влияние на рецепцию D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина, комплексообразование их с пептидом не происходит. Это позволяет предположить, что активирующее влияние ионов металлов на рецепцию D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефа-лина связано с их взаимодействием с опиоидными рецепторами, а не с лигандом. Гиперболическое изменение равновесной константы диссоциации К2набл при повышении концентрации ионов Са2+ и М»2+ вплоть до концентраций 5 мМ и Кзнабл при увеличении концентрации ионов Мп2+, отсутствие комплексообразования ионов металлов с D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалином, обратимый характер эффектов ионов, позволяют предположить следующую схему влияния ионов Са2+, Мп2+ на процесс комплексообразования D-Ala2, 0-Ьеи5-эпкефалина с 8- и /i-рецепторами:
L+ R
к'
LR,
Ме
Км
«К'
Ме
(4.1)
аК'
L + RMe
LRMe,
где Me - ионы металла, К' - константа диссоциации комплекса лиганд рецептор в отсутствие ионов металлов; - константа диссоциации комплекса ионов металла со свободным центром связывания; а-параметр, характеризующий влияние комплексообразования металла с рецептором на константу диссоциации комплекса лиганд-центр связывания. Как следует из схемы (4.1), зависимость концентрации комплекса лиганд-рецептор [B]=[R]+[LRMe] от концентрации лиганда имеет вид:
С использованием соотношения (4.3) можно по известной зависимости наблюдаемых констант диссоциации от концентрации ионов определить все параметры схемы (4.1). В самом деле, в отсутствие ионов металла Кнабл = К', при насыщающих его концентрациях Кнабл = аК'. Линеаризация выражения (4.3)
дает возможность по зависимости 1/Кнабл от (1/К7 — 1/Киабл)/[Ме] найти значение К^1е, а в том случае, если максимального эффекта ионов на комплексообразование лиганда определить не удается, и параметр о. На рис. 4.5 представлены результаты по влиянию ионов Са2+ и Мп2+ на процесс связывания 3H-D-Ala2, Б-Ьеи5-энке-фалина с 6- (А) и ц- (Б) рецепторами в координатах, определяемых выражением (4.4). Видно, что экспериментальные данные хорошо линеаризуются в указанных координатах. Это в свою очередь свидетельствует о том, что влияние ионов на процесс комплексообразования Т)~ Leu 5 - энке ф а л и н а с высоко- и низкоаффин-
ными центрами описывается схемой (4.1) и позволяет определить параметры а и k'^It. (табл. 4.5).
Помимо ионов Са~+ и Мп~+, подробно рассмотренных выше, большой интерес вызывает изучение влияния на связывание 3Н-D-Ala2, Е)-Ъеи5-энкефалина с рецепторами ионов Mg2+, С-о2+, Ni”+. La'54 и лантаноидов. Это обусловлено как исключительно важной ролью ионов Mg2+ для многих биохимических реакций, так и отмеченной в литературе возможной ролью ионов С’о2+ и Ni2+ в регуляции опиоидных рецепторов (Chapman et al., 1980). Исследование ионов La3+ и лантаноидов на опиатную рецепцию представляет интерес в связи с антагонизмом этими ионами многих Са2+-регулируемых процессов. В плане биохимического изучения механизма ионной регуляции рецепции немаловажен и тот
Е [R]o[L]
Кнабл "Ь [L]
(4.2)
где
_аК'([Ме] + К;Ме) [Ме] + аК;Ме
(4.3)
(4.4)
1 пп
Рис. 4.5. Эффект ионов Са2“*" (1), Мп2+ (2), Mg2+ (5), Sr2+ (4) на связывание 3H-D-Ala2, D-Leu5 -энкефалина с высокоаффинным (Л) и низкоаффинным (Б) центрами в координатах, определяемых выражением (4.4)
