Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка):
(А) и 3H-D-Ala2, 0-Ьеи5-ункефали1К1 (В) с мембранным препаратом в полулогарифмических координатах.
Концентрация 3Н-морфина: 1 -0,87 нМ, 2-4,5 нМ; концентрация 3H-D-
Ala2, D-Leu^-энкефалина: 3 - 0,26 нМ, 4 ~ 5,6 нМ; буфер А, 37°С
Результаты исследования зависимости показателей экспонент предэкспоненциальных множителей С; от кънцентрации меченого лиганда для D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина и морфина представлены
Рис. 3.8. Кинетическая кривая ассоциации 0,4 нМ 3H-D-Ala2, D-Leu5-eHKe-фалина опиоидными рецепторами (Л) и ее представление в полулогарифмических координатах (Б, В, Г); буфер А, 37°С
на рис. 3.10-3.13. Из рисунков видно, что: а) показатели экспонент линейно зависят от концентрации соответствующего лиганда и прямые, характеризующие разные центры связывания одного лиганда, явно не параллельны; б) предэкспоненциальные множители отрицательны и гиперболически зависят от концентрации лиганда. По некоторым данным (Boeynaems, Cauntraine, 1980; Варфоломеев, Зайцев, 1982), все перечисленные факты позволяют сделать вывод об отсутствии кооперативных взаимодействий опиоидных рецепторов при связывании 3Н-морфина или 3H-D-Ala2, Г)-Ьеи5-знкефалина. Полученные зависимости (рис. 3.10 и 3.11) лают также возможность оценить значения кинетических констант
in([eU-tel-eMi •*«*)
f «Tf, С
in(CeU-[eJ‘CHceAMct-c.M)
t 'W2, C
t, С
Рис. 3.9. Кинетическая кривая ассоциации 0,87 нМ 3Н-морфина с мембранным препаратом (Л), ее представление в полулогарифмических координатах (Б, В, Г); буфер А, 37°С
диссоциации и ассоциации изучаемых лигандов с отдельными типами опиоидных центров (табл. 3.5), используя уравнение
Ai = -(kai[L] + kdi).
Результаты исследования кинетики диссоциации комплексов 3H-D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина и 3Н-морфина с рецепторами при-
85
Рис. 3.10. Зависимость показателей экспонент Аь Аз, A3 кинетики ассоциации 3H-D-Ala2, D-Leu5 -энкефалина с опиоидными рецепторами от концентрации лиганда; буфер А, 37°С
Рис. 3.12. Зависимость показателей экспонент Ai, А2 кинетики ассоциации 3Н -морфина с опиоидными рецепторами от концентрации лиганда; буфер А, 37°С
Рис. 3.11. Зависимость предэкспо-ненциальных множителей Ci, С2, С3 кинетики ассоциации 3H-D-Ala2, 0-Ьеи5-внкефалина с опиоидными рецепторами от концентрации лиганда; буфер А, 37°С
Рис. 3.13. Зависимость пред-экспоненциальных множителей Ci и С2 кинетики ассоциации 3Н-морфина с опиоидными рецепторами от концентрации лиганда; буфер А, 37°С
ведены на рис. 3.14, 3.15. Сравнение констант скорости диссоциации, полученных разными методами, показывает, что они достаточно хорошо совпадают (табл. 3.5). Обращает на себя
Рис. 3.14. Кинетическая кривая диссоциации 1 нМ 3H-D-Ala2, D-Leu5-0H-кефалина с опиоидных рецепторов (Л) и ее представление в полулогарифмических координатах {Б, В, Г); буфер А, 37°С
внимание близость кинетических констант диссоциации морфина для супервысокоаффинного и высокоаффинного центров. Именно по этой причине кинетика диссоциации морфина описывается одним экспоненциальным членом, а не двумя, как можно было бы ожидать, исходя из его использованной при связывании концентрации.
Важным выводом проведенной работы является удовлетворительное совпадение чначений равновесных констант, полученных
из кинетических исследований, со значениями констант, полученных при исследовании в условиях равновесия. Этот факт подтверждает правильность выбранной кинетической модели взаимодействия лигандов в системе опиоидных рецепторов.
Рис. 3.15. Кинетическая кривая диссоциации 0,87 нМ 3Н-морфина с опиоидных рецепторов (Л) и ее представление в полулогарифмических координатах (Б); буфер А, 37°С
Таблица 3.5
Константы скорости взаимодействия лигандов с опиоидными центрами связывания (штрихом отмечены консгганты скорости из экспериментов по изучению кинетики диссоциации в присутствии избытка немеченого лиганда) (буфер А, 37° С)
Лиганд
Центр Параметр D-Ala2, D-Leu5- Морфин
связывания энкефалин
Супервысоко- ка, нМ ---1-с-1 0,008±0,002 0,011 ±0,002
аффинный kd> C_1 0,006±0,001 0,016±0,009
kd’ C_1 0,007±0,002 0,018±0,001
ka, нМ *-c * 0,003±0,001 0,002±0,001
kd> C_1 0,036±0,001 0,017 ±0,004
k'r C_1 0,052±0,018 0,018±0,001
ka, bM-*-c-* 0,00013±0,00011 ---
kd> C_1 0,0028±0,0003 ---
k' , с"1 0,0020±0,0007 ---
________Д.. ________
Нами было изучено влияние различных концентраций предварительно добавленных в систему немеченых лигандов - морфина, D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина и налоксона - на начальные скорости и кинетику ассоциации меченых //-лиганда морфина и (5-лиганда D-Aia2, Б-Ьеи°-энкефалина (Зайцев, 1987а). Из представленных
