Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка):
задачу подробного изучения механизма влияния двухвалентных ионов на рецепцию опиоидов. Однако в настоящее время в литературе практически отсутствуют данные, проливающие свет на природу этого явления. В этой связи нами была поставлена задач^ изучения механизма влияния двух- и трехвалентных ионов металлов на процесс связывания с опиоидными рецепторами лигандов D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина и морфина.
IV.1. ВЛИЯНИЕ ИОНОВ ЩЕЛОЧНОЗЕМЕЛЬНЫХ И ПЕРЕХОДНЫХ МЕТАЛЛОВ НА РЕЦЕПЦИЮ D-Ala2, Б-1еи5-ЭНКЕФАЛИНА
Для выяснения роли эндогенных двухвалентных катионов в процессе комплексообразования 3H-D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина с опиоидными рецепторами мембран головного мозга крыс было исследовано влияние преинкубации препаратов со специфическими комплексонами - EGTA и EDTA. После преинкубации мембран в растворах хелаторов (10 мМ) с последующей отмывкой уровень специфического связывания 3H-D'-Ala2, 0-Ьеи5-энкефали-на снижался в 2-3 раза в равной степени для EGTA и EDTA. Представляло интерес определить, на какие параметры процесса связывания лигандов с рецептором влияет преинкубация с хела-торами. С этой целью изучены изотермы комплексообразования 3Н-D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина с препаратом мембран, преинкуби-рованным с 10 мМ EGTA. Данные экспериментов обрабатывались с использованием вышеописанных подходов (гл. II, III). Анализ полученных результатов показывает, что процесс комплексооЬра-зования 3H-D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина с опиоидными рецепторами препаратов головного мозга крыс и в присутствии хелаторов, как и в их отсутствие, описывается моделью с тремя независимыми типами центров связывания (Varfolomeev et al., 1987; Зайцев, 1987):
L + R^1^6" LRi;
L + R2K^LR2;
L + R3K3^ LR3,
где Ri, R2 и R3 - супервысокоаффинный, высокоаффинный и низкоаффинный центры связывания, как выше было показано, соответствующие 61-центру и классическим 8- и //-рецепторам. Ki на.бл, Кгнабл и Кзнабл - наблюдаемые константы диссоциации, характеризующие эти центры соответственно. Рассчитанные с использованием ЭВМ значения равновесных констант диссоциации Кнабл и концентраций центров связывания R0 приведены в табл. 4.1. Из нее также видно, что преинкубация мембранного
препарата с EGTA приводит к увеличению значения Кг набл- При этом в рамках предложенной модели концентрации центров связывания ([Ri]o, [R2]<h [R3]o), а также К1НабЛ значимо не меняются. Таким образом, для комплексообразования 3H-D-Ala2, Б-Ьеи5-эн-кефалина с ^-центром связывания существенно наличие эндогенных двухвалентных ионов. На связывание лиганда с ^/-центрами, а также супервысокоаффинным ^-центром эндогенные двухвалентные ионы заметного влияния не оказывают.
Таблица 4.1 Влияние преинкубации мембранного препарата головного мозга крыс в буфере В в присутствии 10 мМ ЭГТА на параметры связывания 3H-D-Ala?, D-Leu^-энкефалина (температура 37° С)
Препарат Константы Концентрация цент
мембран диссоциации, ров связывания,
нМ пмоль/мг белка
^1набл ^2 набл ^3 набл [Rib [R2]o Р*з]о
Контрольный 0,56 4,9 127 0,0027 0,051 0,179
Преинкубирован- 0,53 17,3 130 0,0030 0,057 0,170
ный с ЭГТА
Как следует из анализа литературы (Enna et al., 1977; Geisler et al., 1982; Vickroy et al., 1983; Kato et al., 1983; Berru et al., 1983), из всех ионов щелочноземельных и переходных металлов наиболее важными для функционирования мембранно-связанных рецепторов, и в частности опиоидных рецепторов, являются ионы Са2+, Мп2+ и Mg2+. В этой связи в первую очередь нами было изучено влияние на опиатную рецепцию именно этих катионов (Зайцев, Породенко, Варфоломеев, 1984; Породенко, Зайцев, Варфоломеев, 1984; Зайцев, Породенко, Варфоломеев, 1985; Породенко, Зайцев, Варфоломеев, 1985; Varfolomeev et al., 1987).
Результаты исследования эффектов ионов Са2+ и Мп2+ на связывание 3H-D-Ala2, Б-Ьеи5-энкефалина с препаратом мембран головного мозга крыс показывают наличие “активации” процесса связывания 3H-D-Ala2, Б-Ьеи5-энкефалина в присутствии ионов Са2+ и Мп2+. Этот процесс обратим. Действительно, отмывка мембранного препарата рецепторов от добавленных ионов путем промывания в буфере приводит к снижению эффекта ионной активации связывания 3H-D-Ala2, В-Ьеи5-энкефалина, а промывка 3 мМ EDTA полностью его снимает (табл. 4.2).
Результаты исследования влияния указанных ионов на изотермы комплексообразования 3H-D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина с рецепторами представлены в табл. 4.3 и позволяют сделать следующие выводы. Во-первых, добавление ионов Са2+ и Мп2+ в среду инкубации не оказывает влияния на комплексообразование лП-П-Л1а2.
Таблица 4.2
Обратимость эффектов ионов на связывание ^H-D-Ala^, D-Leu^-энкефалина с мембранным препаратом при 37° С
Усаовия Уровни связывания, распады в мин
без до 1мМ 1мМ 0,5мМ 0,15мМ 20мкМ 50мкМ
