Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка):
оидные пептиды имеют наивысшее сродство, как это предполагается в работах Пастернака и.Лутца (Wolozin, Pasternak, 1982; Lutz et al., 1984; Munson et al., 1984), либо супервысокоаффинные центры связывания морфина отличны от супервысокоаффинных центров D-Ala2, D-Leu5 -энкефалина?
Лля проверки высказанных предположений были проанализированы кривые конкурентного вытеснения меченых морфина и D-А1а2, 0-Ьеи°-энкефалина немечеными лигандами (рис. 3.5, 3.6, табл. 3.4). При этом концентрации меченых лигандов были выбраны такими, чтобы уровень специфического связывания в ос-
новном определяяСя'супервысокоаффинными и высокоаффинными центрами соответствующих лигандов. Из табл. 3.4 хорошо видно, что константы сродства морфина и D-Ala2, Б-Ьеи5-энкефалина к “своим” и “чужим” супервысокоаффинным центрам отличаются не менее чем на порядок. Последнее говорит о различном характере взаимодействия //- и 6-лигандов с супервысокоаффинным центром связывания морфина и с супервысокоаффинным центром энкефалина и позволяет предположить существование помимо супервысокоаффинного центра связывания морфина супервысокоаффинного центра, имеющего наибольшее сродство к D-Ala2, Б~Ьеи5-энкефалину, который по аналогии с (лi можно было бы обозначить как 6i.
Рис. 3.5. Конкурентное вытеснение 1,6 нМ ^H-морфиНа (j4) и 0,9 нМ ^H-D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина (Б) немеченым морфином (/) и D-Ala2, 0-Ьеа5-эн-кефалином (2); буфер А, 37°С
Анализ кривых конкурентного вытеснения позволяет сделать еще два важных вывода. Во-первых, морфин, D-Ala2, D-Leu5-3HKe-фалин в концентрациях порядка 10-5 М практически полностью вытесняют меченые лиганды. Это говорит о том, что общие пулы рецепторов ц- и 6-лигандов совпадают. Во-вторых, результаты количественного анализа конкурентного вытеснения (табл.
3.4) указывают на то, что высокоаффинные центры связывания морфина являются низко аффинными для D-Ala2, 0-Ьеи°-энкефа-лина и, наоборот, высокоаффинные центры связывания D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина являются низко аффинными центрами связывания морфина.
При этом сравнение параметров высокоаффинных центров морфина и высокоаффинных центров D-Ala2, 0-Ьеи5~энкефалина с литературными (Chang et al., 1979; Kosterlitz, 1985) говорит в
Рис. 3.6. Конкурентное вытеснение 0,73 нМ 3Н-морфина (Л) и 1,3 нМ 3H-D-
Ala2, D-I _,еи5-энкефалина (Б) немеченым морфином (1) и D-Ala2, D-Leu5-aH-кефалином (2); буфер Б, 37°С
Таблица 3.4
Количественный анализ кривых конкурентного вытеснения меченых лигандов немечеными (буфер А, 37° С)
Концент Немеченый .......% ........ к, % к,
рация лиганд вытес нМ вьп ме нМ
меченого няемой няемой
лиганда метки метки
D-Ala'**, D-Ala2, D-Leu5- 25 0,7 75 7,2
D-Leu5- энкефалин
энкефалин
0,9 нМ морфин 35 15 65 200
морфин 25 0,8 75 17,7
Морфин
1,6 нМ D-Ala2, D-Leu5- 30 8 70 70
энкефалин
пользу того, что эти центры соответствуют классическим и опи-оидным рецепторам.
III.17.2. Кинетика взаимодействия лигандов .с опиоидными рецепторами
С целью выявления возможного наличия или отсутствия кооперативных эффектов в системе опиоидных рецепторов, а также определения констант скорости взаимодействия лигандов с рецепторами была изучена кинетика ассоциации и диссоциации морфина и D-Ala*, Б-Ьеи5-энкефалина с мембранными препарата-
ми головного мозга крыс. Кинетические кривые неспецифическо-го связывания лигандов удовлетворительно описываются одним экспоненциальным членом (рис. 3.7) с характеристическими временами 5 и 7 мин для 3Н-D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина и 3Н-морфина соответственно. Анализ данных по кинетике специфического связывания 3Н-морфина, 3H-D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина в полулогарифмических координатах показывает, что процесс комплексооб-разования 3H-D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина с опиоидными рецепторами описывается тремя экспоненциальными членами (рис. 3.8);
[В] = С! eAlt +С2 eA2t + Сз еЛз1 +[В]оо,
где [В]оо - уровень связывания лигандов в условиях равновесия: кинетическая кривая 3Н-морфина описывается двумя экспоненциальными членами (рис. 3.9). Полученные результаты вполне согласуются с данными равновесных исследований (см. табл. 3.3). Некоторое кажущееся противоречие наблюдается лишь в случае с морфином. Однако двухэкспоненциальный характер кинетики связывания в этом случае можно объяснить тем, что при используемых нами концентрациях меченого морфина 7 нМ вклад его взаимодействия с низкоаффинным центром не превышает 5-10% и поэтому реально не может быть выделен.
ln([BHcU- [Вне]) ln([e„eU- [Ане Л
Г, С
Рис. 3.7. Кинетическая кривая неспецифического связывания 3Н-морфина
