Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка):
[Ме], им
[ме], мм
Рис. 4.19. Эффекты Са^+ (i), Мп2+ (2) и Ni^+ (3) на константу диссоциации комплекса 3Н -морфина с высокоаффинным центром связывания К2Набл
зации экспериментальных результатов (рис. 4.19) в координатах уравнения (4-4) (рис. 4.20). В-третьих, анализ данных, представленных на рис, 4.19-4.21 и в табл. 4.9, дает возможность сделать следующий важный вывод: ионы Са2+ не только не активируют, но даже, наоборот, ингибируют процесс взаимодействия 3Н-морфина с //-рецептором (1/а — 0,49). Это ингибирование может лежать в основе антагонизма ионами Са2+ эффектов морфина, в частности анальгезии (Ross et al., 1974; Sanghvi, Gerson, 1977; Chapman, Way, 1980; Munoz, Fearon, 1982).
’^гнаВя)’СМеУ,Й‘"м *
Рис. 4.20. Эффект ионов Ca2+ (I), Mn2+ (2), La3+ (3), Gd3"*" (-4) на
связывание 3Н-морфина с высокоаффинными центрами в координатах, определяемых выражением (4.4); буфер В, 37°С
Таблица 4.9 Параметры влияния ионов металлов на связывание 3Н-морфина (буфер В, 37° С)
Ион металла КМе2’мкМ " а-т -1
Са2+ 2600±400 0,49
Мп2+ 75±6 5,0
x\i2+ 6,6±0,5 5,4
La3+ 270±35 4,9
Gd3+ 11±2 4,9
Таким образом, влияние ионо^е Mn2+, Nr"1', La3+, Gd3H", Са2+ на комплексообразование 3Н-морфина с //-рецептором описывается
той же самой схемой (4.5), что и действие ионов на процесс комплексообразования 3Н-D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина этим рецептором.
Последнее говорит о том, что ионная регуляция взаимодействия лигандов с опи-оидным рецептором не зависит от того, является ли данное соединение гибкой пептидной молекулой либо структурированной молекулой алкалоидной природы.
Изучение механизма влияния ионов щелочноземельных и переходных металлов на рецепцию D-Ala2, D-Leu5-энкефалина и морфина позволяет предположить наличие катионсвязывающих участков в структуре опиоидных рецепторов. Большой интерес в плане дальнейшего исследования представляет выявление взаимосвязи катионсвязывающих участков рецепторов с кальциевыми каналами мембран нервных клеток. Важное значение имеет также выяснение природы функциональных групп, опосредующих катионную регуляцию рецепторов опиоидов.
°1 ь 2 * J • 4
Рис. 4.21. pH-зависимость уровней связывания 3Н-морфина с высокоаффинными центрами в отсутствие двухвалентных ионов металлов (I); в присутствии 5 мкМ №С12 (2), 3 мМ МпС12 (3), 5 мМ СаС12 (-4); буфер Г, 37°С
IV.5. ОТЛИЧИЕ КАТИОНСВЯЗЫВАЮЩИХ УЧАСТКОВ ОПИОИДНЫХ РЕЦЕПТОРОВ И КАТИОННЫХ ЦЕНТРОВ СВЯЗЫВАНИЯ ПОТЕНЦИАЛЗАВИСИМЫХ КАЛЬЦИЕВЫХ КАНАЛОВ НЕЙРОМЕМБРАНЫ
В литературе имеются указания на возможную структурную сопряженность опиоидных рецепторов и специфических кальциевых каналов (Guerra-Munoz et al., 1979). С целью проверки этого предположения было проведено сопоставление свойств катионных центров связывания потенциалзависимых кальциевых каналов и катионсвязывающих участков опиоидных рецепторов (Зайцев, Породенко, Варфоломеев, 1983; Породенко, Зайцев, Варфоломеев, 1985).
Выше было показано (см.4.3), что блокатор кальциевых каналов верапамил в концентрациях до 10-3 М не оказывает влияния на связывание лигандов с //-рецепторами, неконкурентно ингибируя связывание лиганда с 6- рецепт о рами. Сравнение констант
диссоциации комплексов ионов Са2+ с 6- и //-рецепторами (см. табл. 4.5, 4.9) показывают, что эти константы, равные соответственно 1,05 ± 0, 09 мМ, 2, 2 ± 0, 3 мМ. 2,б±0,4мМ, в 5-10 раз превышает значение Кгп, характеризующее комплексообразова-ние ионов Са2+ со специфическим катионсвязывающим участком на потенциал-зависимом канале мембраны, равное 0,27±0,04 мМ (Зайцев, Породенко, Варфоломеев, 1983; Породенко, Зайцев, Варфоломеев, 1985).
Приведенные данные говорят в пользу высказанного предположения о различии исследованных нами катионсвязывающих участков опиоидных рецепторов и центров связывания ионов Са“+ на ионном канале. Данное предположение также подтверждается результатами конкурентного ингибирования ионами переходных металлов транспорта Са2+ (Bygrave, 1978; Rosenberg, Triggle, 1978; Kostyuk, 1981). Действительж , по эффективности ингибирования ионы металлов образуют следующий ряд (Kostyuk, 1981): Ni2+ > Со2+ > La3+ > Gd3+ > Мп2+. Этот ряд не соответствует параметрам взаимодействия ионов металлов с 8-рецепт о рами. Ионы Ni2+ и Со2+ крайне слабо взаимодействуют с катионсвязывающим участком 6-рецептора. Ряд не соблюдается также и в случае /i-рецепторов: К^п3 < KLa3 (табл. 4.5 и 4.9). Против предположения о прямой связи катионсвязывающих участков опиоидных рецепторов'и кальциевых каналов говорят также следующие данные. Ионы Zn2+ являются ингибиторами кальциевого транспорта. Однако, как нами показано (см. IV.3), Zn2+ не влияет на комплексообразование лигандов с /i-рецептором, а на 6-рецепторе хотя и ингибирует связывание лиганда, но не конкурирует
¦ ионами Са2+ за катионсвязывающий участок рецептора.
Таким образом, результаты исследования свидетельствуют о том, что изученные катионсвязывающие участки ц- и 6-рецепторов не идентичны центрам связывания ионов Са2+ на потенциалзависимых кальциевых каналах нейромембраны.
