Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Медицина -> Зайцев С.В. -> "Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы " -> 36

Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.

Зайцев С.В., Ярыгин К.Н., Варфоломеев С.Д. Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы — МГУ, 1993. — 256 c.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка): narkomaniya1993.djvu
Предыдущая << 1 .. 30 31 32 33 34 35 < 36 > 37 38 39 40 41 42 .. 108 >> Следующая

Таблица 3.6
Начальные скорости (Vg-lO^, нМ ¦ с-1) процесса ассоциации ®Н-морфина и 3H-D-Ala2, D-Leub -энкефалина с препаратом мембран в присутствии и в отсутствие немеченых лигандов (буфер А, 37° С)
Концентрация Концентрация меченого лиганда
3 Н-морфин 3H-D-Ala 2, D-Leu^ -энкефалин
лиганда 0,39 нМ 0,69 нМ 1,18 нМ 0,34 нМ 1,35 нМ 3,55 нМ
Морфин
0 3,2 3,9 7,8 2,9 9,1 17,0
1 нМ 2,4 3,4 5,1 2,7 8,0 16,4
10 нМ 2,1 3,0 4,1 2,9 8,6 14.7
0,2 нМ 2,6 2,6 5,6 3,2 6,9 14,7
Налоксон
4 нМ 2,2 1,9 5,1 2,0 3,3 12,3
D-Ala2, D-Leu5- энкефалин
3 нМ 3,7 4,2 7,4 2,1 7,5 10.5
20 нМ 3,3 2,7 6,1 1,8 6,1 9,4
в табл. 3.6 результатов видно, что низкие концентрации немеченого //-лиганда практически не влияют на начальную скорость и кинетику ассоциации 6-лиганда и наоборот.
Поскольку меченый лиганд вводили в . истему только после того, как устанавливалось равновесие немеченый лиганд - рецепторы, полученные результаты говорят в пользу выдвинутого предположения о существовании двух различных супервысокоаф-финных центров связывания морфина и D-Ala2, 0-Ьеи5-энкефалина Их и ё2 соответственно.
III. 17.3. Зависимость физико-химических свойств опиоидных рецепторов от температуры
При физико-химическом исследовании процессов комплексообразования важным моментом является изучение влияния на этот процесс температуры. Последнее в свою очередь позволяет определить термодинамические параметры комплексообразования и тем самым получить ценную информацию о механизме процессса связывания.
Исследование влияния температуры на свойства опиоидных рецепторов проводилось нами в условиях равновесия (Зайцев, 1987; Varfolomeev et al., 1987; Курочкин с соавт., 1988). Вследствие этого первым этапом данной работы были выяснение времен установления равновесия процесса связывания при той или иной температуре, а также проверка обратимости свойств рецепторов при температурных переходах. Результаты проведенной работы показывают, что уровень “плато" на кривой связывания для каждого лиганда полностью достигается за 3 ч при 0°0, за 40 '.тин при 25°С, за 15 мин при 37°С и за 10 мин при 40°С\ и это
связывание обратимо. Полученные данные позволяют правильно выбрать время инкубации мембранного препарата с лигандом при той или иной температуре.
Изучение температурных зависимостей в сложных биологических системах, какими являются мембранные препараты рецепторов, требует проверки обратимости температурных переходов, отсутствия необратимой инактивации мембранных рецепторов. В противном случае трудно говорить о равновесии процессов и получить характеризующие их термодинамические параметры. С целью проверки возможности существования необратимых изменений при варьировании температуры было изучено влияние обратимых температурных переходов на свойства опиоидных рецепторов. Как видно из данных, представленных в табл. 3.7, необратимых изменений рецепторов в изучаемом диапазоне температур не наблюдается.
Таблица 3.7
Влияние температурных переходов на уровень связывания опиатных лигандов с мембранными препаратами (буфер А)
Ур овень связывания, нМ-10а
Температура изменения процесса связывания, “С
Лиганд 25 25 30 30 37 37 37
Температура предварительной инкубации , иС
0 37 0 37 0 30 40
Морфин, 0,3 нМ 7,4 7,2 5,9 6,1 3,2 3,5 3,3
D-Ala2, D-Leu5- 9,2 9,4 8,1 7,5 4,5 4,5 4,4
энкефалин, 0,3 нМ
Для получения термодинамических характеристик взаимодействия опиатных лигандов с рецепторами были изучены изотермы связывания 3Н-морфина и 3H-D-Ala2, Б-Ьеи5-энкефалина с мембранными препаратами головного мозга крыс. Обработка полученных результатов с использованием МИМ и разностного метода анализа показывает, что концентрации различных типов опиоидных рецепторов при изменении температуры остаются постоянными. При этом константы диссоциации морфина и D-Ala2, D-Ьеи5-энкефалина в зависимости от температуры изменяются. Соответствующие результаты, представленные на рис. 3.16-3.17, позволяют сделать следующие выводы. Во-первых, в интервале температур 32-40°С в координатах Аррениуса для каждого из трех изученных лигандов наблюдается вполне удовлетворительная линейность, что позволяет оценить значения энтальпии ДН связывания в указанном температурном диапазоне (табл. 3.8). Во-вторых, при температуре ниже 32°С для всех типов лигандов и рецепторов в координатах Аррениуса наблюдаются заметные отклонения от линейности. Настоящий факт указывает на серь-езны' и ш< ш ния в процессах взаимодействия лигандов с опиоид-ными I'ciu-in >рами при переходе к температуре ниже 32°С.
Предыдущая << 1 .. 30 31 32 33 34 35 < 36 > 37 38 39 40 41 42 .. 108 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed