Наркомания. Нейропептид Морфиновые рецепторы - Зайцев С.В.
ISBN 5-211-02349-8
Скачать (прямая ссылка):
Как ни странно, в течение довольно долгого времени изучались лишь центральные с-рецепторы. Единственным исключением был аденогипофиз, в котором были обнаружены сг-рецепторы, что говорит о возможной их роли в регуляции синтеза и/или
выброса тропных гормонов. Действительно, рацемат SKF 10047 способен модулировать уровень гормонов в крови, причем в ряде случаев эффект не блокируется налоксоном и другими опиатными антагонистами (Pechnick et al., 1985).
При систематическом исследовании периферических органов на присутствие центров связывания (+)-SKF 10047 оказалось, что таковые присутствуют в большинстве органов (Самовилова и др.,
1986). В дальнейшем более подробно были изучены центры связывания (+)-SKF 10047 в печени и на клетках имунной системы (Самовилова и соавт., 1986; К.Н. Ярыгин и соавт., 1988; Samovilo-va et al., 1988; Su et al., 1988; Wolfe et al., 1988).
Свойства с-рецепторов отличаются от свойств ц-, 5 и хг-ре-цепторов. Аргументом в пользу включения их в число опиоидных рецепторов является, по существу, лишь то, что рацематы некоторых опиатов обладают одновременно аффинностью по отношению к сг-рецепторам и классическим опиоидным рецепторам. Несмотря на предложение не называть с-рецепторы опиоидными (Largent et al., 1986), большинство исследователей все же продолжают это делать, а изучение их ведут в основном коллективы, специализацией которых является опиоидергическая регуляция.
Изложенные выше данные свидетельствуют о большой сложности опиоидергической системы. Несмотря на большое количество публикаций, многие аспекты опиоидергической регуляции разработаны недостаточно. Это, в частности, относится к взаимодействию опиоидов с опиоидными рецепторами на периферии.
111.17. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ МОРФИНА И ЭНКЕФАЛИНОВ С ОПИОИДНЫМИ РЕЦЕПТОРАМИ
Как видно из проведенного выше рассмотрения, основной прогресс в изучении системы опиоидных рецепторов был достигнут благодаря изучению связывания с ними меченых лигандов. Однако существование гетерогенных опиоидных рецепторов ставит перед исследователями целый ряд проблем: 1) со сколькими типами опиоидных рецепторов взаимодействуют опиаты и энкефалины (что может иметь важное значение при формировании фармакологического ответа)? 2) кг^к соотносятся между собой высокоаффинные и низкоаффинные центры связывания опиатов и энкефалинов (например, ц и 6)7 3) существуют ли супервысокоаффинные центры связывания (типа цi)? 4) какие количественные характеристики взаимодействия лигандов с теми или иными типами опиоидных рецепторов?
Ответы на поставленные вопросы невозможны без проведения физико-химических исследований связывания опиатов и опиоидных пептидов с опиоидными рецепторами.
III.17.1. Доказательство существования супервысокоаффинных центров связывания опиатных лигандов
Разработка новых методов математического анализа лиганд-рецепторных взаимодействий (МИМ и разностного метода) позволила авторам провести систематическое физико-химическое изучение проблемы гетерогенности опиоидных рецепторов.
Объектом исследования для этой цели был выбран препарат мембран головного мозга крыс (Зайцев с соавт., 1984; Зайцев с соавт., 1985а; Зайцев, 1987; Курочкин с соавт., 1988). Мембранные препараты мозга животных вплоть до настоящего времени являются одним из основных объектов биохимического изучения опиоидных рецепторов, по-видимому, в силу следующих причин: 1) доступности препаратов и простоты их выделения; 2) отсутствия надежных методов биохимического разделения отдельных популяций опиоидных рецепторов; 3) относительно медленного прогресса работ по очистке и выделению рецепторов в чистом виде; 4) исключительно высокого сродства опиатов и опиоидных пептидов к своим рецепторам, что позволяет выделять связывание этих лигандов с рецепторами от процессов неспецифического связывания с мембранами. В качестве среды инкубации выбрана среда, по составу близкая к физиологической, содержащая 5 мМ HEPEs, 120 мМ NaCl, 5 мМ КС1, 1 мМ СаС12, 1 мМ MgCl2, 0,5 мМ Na2HP04, pH 7,4 (буфер А) температура 37°С.
Поскольку мембранный препарат головного мозга представляет собой сложную гетерогенную систему, нами была изучена возможность диффузионных затруднений в процессах комплексообразо-вания лигандов. Проведенное исследование , , п ( (
кинетических кривых 20 ЬО С 10 20 ШН 7 2~Ч~
ассоциации Н-морфи-
на, 3Н-налоксона И Рис. 3.1. Кривые ассоциации 0,9 нМ 3Н-налоксо-
3H-D-Ala2, D-Leu5-3H- на (^), 0,5 нМ 3Н-морфина (Б) и 0,6 нМ 3H-D-Ala2,
кефалина С препара- 0-Ьеи5-энкефалина (В) с мембранными препарата-
ми при различных режимах перемешивания: 1 -
тами меморан голов- с гг
1 без перемешивания; 2-60 об/мин; 3 - 180 об/мин
ного мозга крыс при (1,8 мг белка/мл, буфер А, 37°С) различных режимах
перемешивания (Зайцев, 1987) показало, что режим перемешивания не оказывает влияния на кинетику процессов связывания лигандов (рис. 3.1), что позволяет сделать вывод об отсутст-
