Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
стеклянные шпатели. Для посевов жидких материалов наряду с петлей
используют пастеровские и градуированные пипетки. Первые предварительно
изготовляют из стерильных легкоплавких стеклянных трубочек, которые
вытягивают на пламени в виде капилляров. Конец капилляра сразу же
запаивают для сохранения стерильности. У пастеровских и градуированных
пипеток широкий конец закрывают ватой, после чего их помещают в
специальные пеналы или обертывают бумагой и стерилизуют.
При пересеве бактериальной культуры берут пробирку в левую руку, а правой
вынимают из нее ватную пробку над пламенем горелки, набирают петлей
посевной материал, после чего закрывают пробирку пробкой, как описано на
с. 23. Затем в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным
материалом, опуская ее до конденсата в нижней части среды, и
зигзагообразным движением распределяют материал по скошенной поверхности
агара. Вынув петлю, обжигают край пробирки и закрывают ее пробкой. Петлю
стерилизуют в пламени горелки и ставят в штатив. Пробирки с посевами
надписывают, указывая дату посева и характер посевного материала (номер
исследования или название культуры).
При работе с пипеткой прежде всего ее освобождают от бумаги или вынимают
из пенала, быстрым движением проводят над пламенем горелки, вводят в
пробирку и остужают об ее внутреннюю сторону. Затем всасывают посевной
материал ртом и, соблюдая описанные Еыше правила, выдувают его в пробирку
или другую лабораторную посуду.' Микробную культуру безопаснее всасывать
через резиновую трубку или с помощью резиновой груши. Отработанную
пипетку опускают в банку с дезинфицирующим раствором. Таким же образом
производят посевы пастеровскими пипетками, предварительно обламывая
запаянный конец.
49
Посевы газоном производят шпателем ца питательный агар в чашке Петри. Для
этого, приоткрыв крышку, петлей или пипеткой наносят посевной материал на
поверхность питательного агара. Затем проводят шпатель через пламя
горелки, остужают его о внутреннюю сторону крышки и растирают материал по
всей поверхности среды. При этом крышку придерживают левой рукой и
одновременно вращают чашку, не отрывая ее от стола. После инкубации
посева появляется равномерно сплошной рост бактерий.
МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ
АЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ
Выделение отдельных видов бактерий из исследуемого материала,
содержащего, как правило, смесь различных микроорганизмов, является одним
из этапов любого бактериологического исследования, проводимого с
различными целями: диагностики заболеваний, определения микробной
обсеменен-ности окружающей среды и т.д. Для выделения чистой культуры
применяют методы, основанные на: 1) механическом разобщении бактериальных
клеток; 2) предварительной обработке исследуемого материала с помощью
физических или химических факторов, оказывающих избирательное
антибактериальное действие; 3) избирательном подавлении размножения
сопутствующей микрофлоры физическими или химическими факторами во время
инкубации посевов; 4) способности некоторых бактерий быстро размножаться
в организме чувствительных к ним лабораторных животных (биопробы). ,
/Для механического разобщения клеток бактерий исследуемый материал петлей
или пипеткой наносят на поверхность питательного агара в чашку Петри и
равномерно распределяют стерильным шпателем. Затем этим же шпателем (не
прожигая его в пламени горелки) материал растирают по поверхности
питательного агара во второй чашке.
Йосев материала также делают бактериальной петлей. Для этого в верхней
части чашки густо заштриховывают зигзагообразными движениями петли
небольшой участок агаровой среды, освободив таким образом петлю от
излишнего материала. Затем наносят параллельные штрихи по остальной части
среды. Иногда применяют метод пластинчатых разводок, который заключается
в перемешивании различных разведений исследуемого материала с
расплавленным и остуженным питательным агаром в колбе или пробирке. После
этого его разливают в чашки Петри и инкубируют в термостате. Для
уничтожения сопутствующих неспорообразующих микроорганизмов иссле-
50
дуемый материал прогревают при 80°С или подвергают кратковременному
кипячению. Споры микроорганизма при этом сохраняются и при посеве
прогретого материала на питательную среду прорастают, образуя чистую
бактериальную культуру в том случае, если принадлежат только данному
виду. Если в исследуемом материале содержатся споры разных видов
бактерий, то данный метод для получения чистой культуры непригоден.
Подавление размножения посторонней микрофлоры при посеве исследуемого
материала на питательные среды достигается воздействием на них каких-либо
факторов, не препятствующих размножению основного микроба: неодинаковой
оптимальной температуры для роста разных бактерий, антибиотиков или
других химических веществ, а также фагов. В первом случае посевы
инкубируют при температуре, задерживающей рост сопутствующей микрофлоры.
Так, например, для выделения чистой культуры бактерий чумы посевы
