Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Борисов Л.Б. -> "Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии" -> 23

Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.

Борисов Л.Б. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии — М.: Медицина, 1984. — 256 c.
Скачать (прямая ссылка): rukovodstvoklabzadaniyampomikroekonomiki1984.djvu
Предыдущая << 1 .. 17 18 19 20 21 22 < 23 > 24 25 26 27 28 29 .. 96 >> Следующая

йодной настойкой, вторично протирают спиртом и обжигают.
Для заражения в аллантоисную полость в скорлупе над воздушной камерой
(границы ее заранее обводят карандашом при просвечивании яйца)
проделывают небольшое отверстие с помощью ножниц, скальпеля или
специального буравчика. Шприцем вводят 0,1-0,2 мл вируссодержащего
материала на глубину 2-3 мм ниже границы воздушной камеры. Отверстие в
скорлупе заливают расплавленным парафином.
61
, ¦"''I
/
'белок
Скорлупа
Аллантоисное полость
Воздушный мешок
I Уорионаллантоиснай мембрана
_Z Амниотическай
полость
Желточный мешок
Рис. 34. Способы заражения куриного эмбриона.
I - в амнион; 2 - в аллантоисную полость; 3 - в желточный мешок.
Вскрытие зараженных эмбрионов производят в сроки максимального накопления
вируса (через 48-72 ч инкубации при 37°С). После обработки спиртом и 2%
йодной настойкой скорлупу рассекают ножницами немного выше очерченной
карандашом границы воздушной камеры, наклоняя яйцо так, чтобы избежать
попадания скорлупы в полость (рис. 35). Скорлупу отбрасывают, осторожно
снимают ее оболочку и рассматривают хорион-аллантоисную оболочку вокруг
места заражения, отмечая наличие или отсутствие очагов поражения-
геморрагий, белесоватых очагов (рис. 36). Затем пастеровской пипеткой
прокалывают хорион-аллантоисную оболочку в участке, свободном от сосудов,
и отсасывают аллантоисную жидкость. После этого извлекают хорион-
аллантоисную оболочку, которую дважды промывают изотоническим раствором
хлорида натрия, помещают в чашку Петри и отмечают на черном фоне наличие
специфических поражений.
Постановка РГА. После вскрытия куриного эмбриона аллантоисную жидкость
отсасывают и разливают в пробирки или лунки плексигласовой пластины в
объеме 0,5 мл (для контроля берут 0,5 мл такой же жидкости незараженного
эмбриона). Затем добавляют по 0,2 мл 1% суспензии отмытых куриных
эритроцитов и выдерживают при комнатной температуре. Результаты реакции
учитывают через 40 мин после оседания эритроцитов: I I II
выраженная гемагглютинация - тонкая
62
г
i
Рис. 35. Вскрытие куриного эмбриона.
пленка из склеившихся эритроцитов на дне пробирки, имеющая вид зонтика; I
I I наличие просветов в пленке; ++ наличие пленки с фестончатыми краями
из склеившихся эритроцитов; + хлопьевидный осадок эритроцитов, окруженный
зоной комочков агглютинированных эритроцитов; - резко очерченный осадок
эритроцитов, неотличимый от контроля. Наличие гемагглютинации в опытных
пробирках при ее отсутствии в контрольных указывает на содержание вируса
в исследуемой жидкости.
Тема 10. БАКТЕРИАЛЬНЫЕ ВИРУСЫ (ФАГИ)
/
Вирусы бактерий (фаги), или бактериофаги, широко распространены в
окружающей среде - водоемах, почве. Фаги кишечных бактерий - кишечной
палочки, шигелл, сальмонелл - могут быть выделены из сточных вод и
испражнений. Стафилофаги обнаруживаются в слизи из носоглотки, на коже и
в раневом отделяемом, фаги клостридий анаэробной раневой инфекции -в
раневом отделяемом, почве. Наличие фага в среде указывает на присутствие
чувствительных к нему бактерий.
Существуют вирулентные и умеренные фаги. Вирулентные фаги вызывают
инфекцию, заканчивающуюся лизисом бактериальных клеток и синтезом новых
фаговых частиц. Умеренные фаги не визируют зараженные ими клетки.
63
Рис. 36. Поражение на хорион-аллантоисной оболочке куриного эмбриона, з
араженного вирусом оспы.
ДНК этих фагов включается в хромосому бактерий и передается при их
делении неограниченному числу потомков. Такой тип взаимодействия фага с
клеткой называется лизогенией, а бактерии, несущие в'своей хромосоме
фаговую ДНК (профаг), являются лизогенными. Они широко распространены в
природе.
Репродукция вирулентного фага в клетках бульонной бактериальной культуры
сопровождается, их лизисом и просветлением среды. На газоне
чувствительных бактерий, выращенных на агаровой среде в чашке Петри, фаги
образуют зоны очагового или сплошного лизиса, что зависит от их
концентрации. Зоны очагового лизиса получили название негативных колоний
фага, или стерильных пятен - бляшек (рис. 37, о. б). Они имеют
морфологию, характерную для определенных фагов, и образуются из одной
фаговой частицы при внедрении ее и последующей репродукции в
бактериальных клетках.
Для получения "чистой линии" фага (свободной от примеси других фагов)
проводят последовательные пассажи морфологически однотипных негативных
колоний на газоне одного и того же бактериального штамма.
Большинство фагов характеризуется видоспецифичностью в отношении
бактерий. Однако существуют фаги, которые могут поражать только отдельные
варианты одного и того же вида бактерий. Их используют для определения
фаготи-пов (фаговаров) внутри данного вида. Вместе с тем имеются фаги,
лизирующие несколько родственных видов бактерий.
В практической работе фаги применяют для: 1) фаготипи-рования бактерий,
т. е. определения фаготипа по лизису штаммов бактерий одного и того же
вида типоспецифи-
64
ческими фагами, что важно для маркировки исследуемых культур при
Предыдущая << 1 .. 17 18 19 20 21 22 < 23 > 24 25 26 27 28 29 .. 96 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed