Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
бактерий открыло широкие перспективы для познания биохимических и
генетических механизмов, ответственных за наследственную информацию и
способы ее реализации, систему регуляции синтеза белка и другие процессы,
протекающие в микробной клетке.
Тема 7. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
Питательной средой в микробиологии называют среды, содержащие различные
соединения сложного или простого состава, которые применяются для
размножения бактерий или других микроорганизмов в лабораторных или
промышленных условиях.
Любая питательная среда должна отвечать следующим требованиям: содержать
все необходимые для размножения определенных микроорганизмов вещества в
легкоусвояемой форме, иметь оптимальную влажность, вязкость, pH, быть
изотоничной и по возможности прозрачной. Каждую среду стерилизуют
определенным способом в зависимости от ее состава.
Ряд питательных сред готовят непосредственно в микробиологических
лабораториях из продуктов животного или
42
растительного происхождения (говяжье мясо, молоко, яйца, сыворотка крови,
овощи, дрожжи, казеин) или из искусственно полученных из этих продуктов
веществ (пептон, амино-пептид, дрожжевой и кукурузный экстракты).
Большое значение имеет наличие в питательной среде ростовых факторов,
которые играют роль катализаторов метаболических процессов, главным
образом витаминов группы В, никотиновой кислоты и др.
По консистенции питательные среды могут быть плотными, жидкими и
полужидкими. Плотные среды готовят путем добавления к жидкой среде 1,5-2%
агара, полужидкие- 0,3-0,7% агара, который представляет собой продукт
переработки особого вида морских водорослей и в застывшем состоянии
придает среде плотность. Агар плавится при температуре 80-86°С и
затвердевает при температуре около 40°С.
В некоторых случаях для получения плотных питательных сред используют
желатин (10-15%). Такие естественные среды, как свернутая сыворотка
крови, свернутый яичный белок, сами по себе являются плотными.
В бактериологической практике чаще всего используют сухие питательные
среды, которые изготовляются в промышленных масштабах - триптические
гидролизаты дешевых непищевых продуктов (рыбные отходы, мясокостная мука,
технический казеин) и питательный агар. Сухие среды могут храниться в
течение длительного времени, удобны при транспортировке и имеют
относительно стандартный состав.
По целевому назначению питательные среды делят на основные, элективные и
дифференциально-диагностические.
К основным относятся среды, применяемые для выращивания многих бактерий.
Это триптические гидролизаты рыбных продуктов или казеина, из которых
готовят жидкую среду -питательный бульон и плотную -питательны й агар.
Такие среды служат основой для приготовления более сложных: сахарных,
кровяных, сывороточных и других комбинированных, удовлетворяющих пищевые
потребности более требовательных патогенных бактерий. В качестве основных
иногда используют синтетические питательные среды, приготовленные из
навесок определенных минеральных солей, к которым добавляют аминокислоты,
витамины, глюкозу. К ним также можно добавлять пептон, кукурузный или
дрожжевой экстракт и другие питательные вещества. Синтетические среды
чаще всего применяют в научно-исследовательской практике, а синтетические
среды с упомянутыми
43
экстрактами - в микробиологической промышленности при получении
антибиотиков, вакцин и других препаратов.
Элективные питательные среды предназначены для избирательного выделения и
накопления микробов определенного вида из материалов, содержащих
разнообразную постороннюю микрофлору. Создавая элективные для
определенных микробов питательные среды, исходят из биологических
особенностей, которые отличают данные микробы от большинства других.
Например, избирательный рост стафилококка наблюдается при повышенной
концентрации хлорида натрия, холерного вибриона - в щелочной среде и т.
д.
Дифференциально-диагностические питательные среды применяются для
разграничения отдельных видов (или групп) микроорганизмов. Принцип
построения дифференциально-диагностических сред основан на том, что
разные виды бактерий различаются между собой по биохимической активности
и имеют неодинаковый набор ферментов, расщепляющих субстраты, входящие в
состав питательной среды. В состав дифференциально-диагностической среды
входят следующие основные компоненты: а) основная питательная среда,
обеспечивающая размножение бактерий; б) определенный химический субстрат
(например, лактоза), различное отношение к которому является
диагностическим признаком для данного микроба; в) цветной индикатор
(например, индикатор Андреде), изменение цвета которого свидетельствует о
биохимической реакции и наличии данной ферментной системы у исследуемого
микроорганизма. Дифференциально-диагностические среды широко используются
в лабораторных микробиологических диагностических исследованиях для
дифференциации и идентификации бактерий.
Программа занятия
1. Питательные среды и ингредиенты, используемые для их приготовления
