Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
зависит от материала, подлежащего дезинфекции.
Некоторые вещества (борная кислота, мертиолат, глицерин, фенол) применяют
как консерванты для приготовления лечебных и диагностических сывороток,
вакцин и других препаратов.
Темя 6. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОЦЕНКИ
ЭФФЕКТИВНОСТИ СТЕРИЛИЗАЦИИ И ДЕЙСТВИЯ
АНТИСЕПТИЧЕСКИХ И ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ
Прмрамма занятия
1. Антимикробное действие физических и химических факторов.
2. Методы стерилизации.
3. Аппаратура, используемая для стерилизации.
37
4. Методы определения эффективности стерилизации, действия
антисептических н дезинфицирующих веществ.
С т е р и л и з а ц и я - обеспложивание, т. е. полное уничтожение
вегетативных форм микроорганизмов и их спор в различных материалах.
Стерилизацию проводят физическими методами: 1) воздействием высокой
температуры: 2) путем ультрафиолетового облучения; 3) механическим путем
- фильтрацией жидкостей через бактериальные фильтры, а также химическими
методами.
Физические методы стерилизации. 1. Прокаливание в пламени спиртовки или
газовой горелки. Данный способ применяется ограниченно, например дляv
стерилизации бактериологических петель, препаровальных игл, пинцетов.
2. Стерилизация кипячением. Этим методом стерилизуют шприцы, мелкий
хирургический инструментарий, предметные и покровные стекла и некоторые
другие предметы. Их помещают в стерилизаторы, в которые наливают воду.
Для устранения жесткости и повышения температуры кипения к воде добавляют
1-2% раствора бикарбоната натрия. Кипячение производят не менее чем 30
мин. Однако данный метод не обеспечивает полной стерилизации, так как
некоторые вирусы (например, вирус гепатита) и споры бактерий могут
остаться жизнеспособными.
3., Стерилизация сухим жаром, или суховоздушная стерилизация в сушильном
шкафу (печи Пастера). Метод основан на бактерицидном действии нагретого
до 165-180°С воздуха. При более высокой температуре происходит
обугливание ватных пробок, бумаги, в которую завернута посуда, а при
более низкой температуре требуется больший срок стерилизации. Сухим жаром
стерилизуют стеклянную посуду: чашки Петри, пробирки, пипетки и др.
4. Стерилизация паром под давлением в автоклаве (см. рис. 2).
Один из наиболее эффективных методов стерилизации, который широко
применяется не только в микробиологической практике, но и в клинической
медицине. Работа с автоклавом требует точного выполнения специальной
инструкции и соблюдения правил безопасности. Многие питательные среды,
перевязочный материал, белье стерилизуют при давлении 1 атм в течение 15-
20 мин, питательные среды с углеводами-при 0,5 атм в течение 15 мин, а
обеззараживание инфицированного материала производят при 1,5-2 атм в
течение 20-25 мин (табл. 3).
Максимальную температуру пара измеряет максимальным термометром, который
помещают в автоклав вместе со стери-
Таблица 3. Соотношения между давлением, температурой и продолжительностью
стерилизации в автоклаве
Давление пара, атм Температура, °С Время стерилизации, мин
0 100 30-60 (дробно)
0,5 111 20-30
1 121 15-20
1,5 127 15-20
2 133 15
лизуемым материалом. В некоторых случаях используют химические вещества с
определенной температурой плавления: бензонафтол (110°), бензойную
кислоту (120°С).
5. Стерилизация текучим паром в аппарате Коха или в автоклаве. Данный вид
стерилизации (при незавинченной крышке и открытом выпускном кране)
основан на антибактериальном действии пара в отношении вегетативных
клеток. Он применяется в тех случаях, когда стерилизуемый материал не
выдерживает высокой температуры, например питательные среды с витаминами,
углеводами. Для полного обеспложивания применяют принцип дробной
стерилизации, т. е. стерилизуют материал при 100°С (или 80-90°С) в
течение 20-30 мин 3 дня подряд. При этом вегетативные клетки погибают, а
споры сохраняются и за сутки прорастают. Последующее двукратное
прогревание обеспечивает достаточно надежную стерильность материала.
6. Тиндализация. Дробная стерилизация материалов при 58-56°С в течение
часа 5-6 дней подряд. Применяется для стерилизации легко разрушающихся
при высокой температуре веществ (сыворотка крови, витамины и др.).
7. Пастеризация. Данный метод основан на антибактериальном действии
температуры в отношении вегетативных клеток, но не бактериальных спор.
Нагревание материала производится при температуре 50-65°С в течение 15-30
мин или 70-80°С в течение 5-10 мин с последующим быстрым охлаждением.
Обычно пастеризуют напитки и пищевые продукты (вино, пиво, соки, молоко и
др.).
8. Стерилизация ультрафиолетовыми лучами. Метод основан на бактерицидном
действии УФ-лучей с длиной волны 260-300 мкм. Для стерилизации воздуха в
боксах, операционных, детских учреждениях используют бактерицидные лампы
разной мощности (БУВ-15, БУВ-30).
Механическая стерилизация (фильтрование). Данный метод основан на
механической задержке микроорганизмов и их спор мелкопористыми фильтрами
с определенным диаметром
39
