Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
инкубируют при температуре около 5°С. Во втором случае в питательную
среду вносят соответствующее вещество или фаг в строго определенной
концентрации, препятствующей размножению сопутствующих бактерий, но не
оказывающей выраженного ингибирующего действия на исследуемый микроб.
Кроме упомянутых методов, в бактериологической практике иногда
применяются и другие, например для выделения чистой культуры бактерий
протея (Proteus vulgaris) используют его способность к "ползучему" росту.
Для выделения чистых культур большинства бактерий обычно затрачивается не
более 2-3 сут. Для выращивания микобактерий туберкулеза этот срок
удлиняется до 4-6 нед.
Процесс выделения чистой культуры можно разделить на несколько этапов.
Первый этап. Из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают по Г
раму или другим методом и микроскопируют. Для посева исследуемый материал
в случае необходиости разводят в пробирке со стерильным изотоническим
раствором хлорида натрия. Одну каплю приготовленного разведения наносят
петлей на поверхность питательного агара в чашку Петри и тщательно
втирают шпателем в среду, равномерно распределяя материал по всей ее
поверхности. После посева чашку переворачивают дном кверху, подписывают и
помещают в термостат при 37° С на 18-24 ч.
Второй этап. Просматривают чашки и изучают изолированные колонии, обращая
внимание на их форму, величину, консистенцию и другие признаки. Для
определения морфологии клеток и их тинкториальных свойств из части
исследуемой
51
колонии готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Для
выделения и накопления чистой культуры одну изолированную колонию или
несколько различных изолированных колоний пересевают в отдельные пробирки
со скошенным агаром или какой-либо другой питательной средой. 'Для этого
часть колонии снимают петлей, не задевая соседние колонии.
Третий этап. Отмечают характер роста выделенной чистой культуры.
Визуально чистая культура характеризуется однородным ростом. При
микроскопическом исследовании окрашенного мазка,, приготовленного из
такой культуры, в нем обнаруживаются морфологически и тинкториально
однородные клетки. Однако в случае выраженного полиморфизма, присущего
некоторым видам бактерий, в мазках из чистой культуры наряду'с типичными
встречаются и другие формы клеток.
ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ АНАЭРОБНЫХ
БАКТЕРИЙ
Посевы на анаэробную микрофлору, как спорообразующую (клостридии), так и
особенно неспорообразующую (вейлонеллы, бактероиды, пептококки),
производят в строго анаэробных условиях. Первоначальные посевы делают на
обогатительные среды типа Китта-Тароцци, затем пересевают на плотные
cperfbi; сахарный кровяной агар в чашки Петри, в пробирки с сахарным
питательным агаром или другими средами для получения изолированных
колоний. После инкубации посевов в анаэробных условиях из образовавшихся
колоний бактерий готовят мазки, окрашивают, микроскопируют, а затем
пересевают на среду Китта-'ТароЦци и агаровые среды для выделения чистой
культуры.
При выделении спорообразующих анаэробных бактерий (клостридии)
первоначальные посевь! прогревают на водяной ! бане при 80° С в течение
20 мин для уничтожения вегетативных клеток посторонней микрофлоры,
которая может присутствовать в исследуемом материале (схема 1).
ИДЕНТИФИКАЦИЯ БАКТЕРИАЛЬНОЙ КУЛЬТУРЫ
Идентификацию выделенных бактериальных культур проводят путем изучения
морфологии бактерий, их культуральных, биохимических и других признаков,
которые присущи каждому виду.
Культуральные признаки. К ним относятся морфологические особенности
колоний бактерий, характер роста на плотных и в жидких питательных
средах.
52
Схема 1. Выделение н идентификация чистой культуры бактерий
53
аэробные бактерии выращивают в присутствии кислорода воздуха, анаэробные
бактерии -в бескислородной среде; некоторые бактерии лучше растут при
повышенном содержании С02.
Колонии различаются по величине, форме, цвету, консистенции, контуру
края, структуре и характеру поверхности (рис. 29). По величине колонии
могут быть крупные (диаметр более 4-5 мм), средние (2-4 мм) и малые (1-2
мм), по форме - круглые, розеткообразные, в форме листа и т. д. Цвет
колонии зависит от выработки определенного пигмента - белого, желтого,
красного и др. Колонии беспигментных бактерий бесцветны. По консистенции
различаются сухие, влажные, сочные или слизистые колонии. Поверхность
колонии'бывает гладкой, морщинистой, исчерченной, плоской,
плосковыпуклой, вдавленной. Край колонии может быть ровным, волнистым,
бахромчатым'. Колонии могут иметь аморфную, зернистую, волокнистую
внутреннюю структуру.
Характер роста бактерий в чистой культуре, выращенной на скошенном
питательном агаре, может быть сухим, влажным, ползучим, складчатым,
пигментированным. В жидкой питательной среде одни бактериальные культуры
дают диффузное помутнение, другие характеризуются придонным, пристеночным
ростом; некоторые культуры образуют пленки на поверхности среды, другие -
