Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
собой стеклянную пластинку, в центральной части которой нанесена шкала с
50 делениями. Объект-микрометр представляет собой стекло, в середине
которого имеется эталонная шкала, разделенная на 100 частей. Цена деления
шкалы известна и указана на стекле. Обычно каждое деление шкалы объект-
микрометра равно 10 мкм.
Величину микроорганизмов измеряют окуляр-микрометром, помещая его на
диафрагму окуляра делениями вниз, величину делений -с помощью объект-
микрометра: пластинки, в центре которой нанесена линейка длиной 1 мм.
Линейка разделена на 100 делений, каждое из которых равно 10 мкм. Объект-
микрометр устанавливают на предметном столике микроскопа так, чтобы одно
из его делений совпало с каким-либо делением окуляр-микрометра. Линейки
обоих микрометров должны располагаться параллельно. Затем отмечают число
делений объект-микрометра, в которые полностью укладывается число делений
окуляр-микрометра. Зная величину деления объект-микрометра (10 мкм),
устанавливают величину деления окуляр-микрометра. После этого объект-
микрометр заменяют исследуемым препаратом и определяют размеры
бактериальной клетки линейкой окуляр-микрометра при той же степени
увеличения, при которой была измерена величина его делений.
27
Результаты работы по изучению бактериальной культуры протоколируют (табл.
1).
Таблица 1. Характеристика культуры по морфологическим п тинкторнальным
признакам (форма протокола)
Форма клеток Величина Окраска по Г раму Наличие
Чсислото- Подвиж- ность Вклю- чения
спор кап- сул зерен волю- тина вость
Тема 3. МОРФОЛОГИЯ СПИРОХЕТ
Спирохеты -извитые подвижные бактерии, относящиеся к порядку
Spirochaetales, семейству Spirochaetaceae. Патогенные спирохеты
принадлежат к трем родам: Borrelia, Treponema, Leptospira.
Клетка спирохеты имеет цилиндрическую извитую форму, содержит цитоплазму,
отграниченную цитоплазматической мембраной,. снаружи которой расположена
клеточная стенка со слабовыраженным пептидогликановым слоем. Патогенные
спирохеты имеют длину 3-20 мкм и толщину 0,1-0,5 мкм. Представители
отдельных родов различаютря по длине и толщине, числу и характеру
завитков (табл. 2; рис. 21). Спирохеты грамотрицательны. Боррелии в
отличие от трепо-нем и лептоспир хорошо окрашиваются анилиновыми
красителями. Морфологию трепонем и лептоспир изучают путем микроскопии
живых микроорганизмов в препаратах "раздавленная" или "висячая" капля в
темнопольном или фазовоконтрастном микроскопе, а также в мазках,
окрашенных по Романовскому - Гимзе или специальными методами, например
серебрением.
Программа занятая
1. Методы изучения морфологии спирохет.
2. Дифференцирование спирохет по морфологическим признакам.
28
Рис. 21. Морфология спирохет. а - трепонемы; б - боррелии; в - лептоспир
ы.
Демоистрация
1. Движение лептоспир в темнопольном микроскопе.
2. Препарат лептоспир по Бурри.
3. Препарат бледной трепонемы по Бурри.
4. Препарат боррелий в толстой капле крови. Окраска по Романовскому -
Г имзе.
Задание для выполнения лабораторной работы
Определить родовую принадлежность спирохет в готовом мазке, окрашенном по
Романовскому-Г имзе, используя данные, приведенные в табл. 2.
Методические указания
Морфологию спирохет изучают в препаратах "раздавленная" капля и в мазках,
окрашенных по Романовскому - Гимзе. Нативные препараты микроскопируют в
темном поле или с помощью фазово-контрастного микроскопа, наблюдая за
активным и характерным движением спирохет и особенностями их формы.
Приготовление мазков из крови. На чистое обезжиренное стекло ближе к
одному из его концов помещают каплю крови. Другое предметное стекло,
имеющее шлифованный край, прижимают под углом 45° к капле крови, а затем
скользящим движением передвигают его к свободному концу первого стекла.
При этом кровь распределяется по предметному стеклу тонким слоем.
Высушивают препарат на воздухе, фиксируют в жидком фиксаторе (метиловый
спирт или смесь этилового спирта и эфира).
Для приготовления "толстой" капли на предметное стекло наслаивают 2-3
капли крови, распределяя ее до величины 10-копеечной монеты. После
высушивания на воздухе осторожно наливают несколько капель
дистиллированной воды на 10-15 мин для удаления гемоглобина из
эритроцитов.
Окрашивание препарата по Романовскому- Гимзе смесью метиленового синего,
эозина и азура. На мазок наносят рабочий раствор красителя (2 капли
красителя на 1 мл дистиллированной воды) на 10-20 мин. Затем препарат
промывают водой и высушивают на воздухе.
29
Таблица 2. Морфологические признаки спирохет
Род Количество и характер завитков Характер движения Окраска по
Романовскому - Гимзе
Borrelia Treponema Leptospira 3-10, крупные, неравномерные 8-12,
мелкие, равномерные М ногочислен ные первичные завитки; вторичные завитки
в виде буквы S Толчкообразное, сгибательно-поступательное Плавное,
сгибательно-поступательное Очень активное, вращательно-поступательное
Сине-фиоле- товая Бледно-розовая Розово-сире- неватая
