Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
Эффективность клонирования
НММ-1 10 148 3,6 rh 0,57
НММ-2 * 10 - 1,3+0,18
нмм-з 13 222 0,2+0,06
Исходный штамм 7 2000 5,5 ±0,82
Таблица 34. Агрессивность штаммов возбудителя сетчатого гельминтоспориоза
на сортах ячменя
Сорт Штамм и
60-16 | 161 в
Пиркка 83,2±5,7 160,6 ±7,3 8,3
Мур 178,5± 14,5 209,1+5,7 2,0
Харбин 35,8±5,1 37,2+1,6 0,2
Примечание: р ^ 0,95 при ^ 1,95.
ные примерно в равных концентрациях, рассеивают на поражаемые ткани
растений. Для примера приводим результаты оценки агрессивности мутантных
штаммов, обработанных НММ (табл. 33) по отношению к проросткам сорта
Саратовская 29 и агрессивности двух штаммов возбудителя сетчатой
пятнистости ячменя (табл. 34).
XV.7. ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ УСТОЙЧИВОСТИ РАСТЕНИЙ
Основным способом изучения наследования устойчивости является
гибридологический анализ: скрещивание различающихся по устойчивости
сортов и анализ расщепления во втором гибридном поколении (F2). Для
идентификации генов устойчивости (т. е. для установления их отличия или
тождества с уже известными генами) кроме анализа гибридов используют
также фитопатологические тесты, заключающиеся в сравнении реакций
изучаемых сортов с реакциями линий - носите-
37J
лей известных генов устойчивости (например, линий серии Thatcher). Эти
сравнения правильнее использовать не для обнаружения известных генов у
исследуемого сорта, а для того, чтобы исключить их присутствие.
XV.7.1. ИНФЕКЦИОННЫЙ МАТЕРИАЛ
ДЛЯ ГИБРИДОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА
Клоны для гибридологического анализа должны быть чистыми и вызывать
отчетливую реакцию сверхчувствительности у изучаемых сортов. Если
анализируется потомство от скрещивания двух устойчивых сортов, тест-клоны
должны быть авирулентны к обоим. Когда анализируемые сорта обладают
достаточно эффективной устойчивостью, клоны, удовлетворяющие этим
требованиям, встречаются часто и их подбор не вызывает затруднений.
XV.7.2. ГИБРИДОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ УСТОЙЧИВОСТИ
Проявление устойчивости хозяина зависит от генотипа паразита, и случайно
выбранный для гибридологического анализа единственный тест-клон гриба мог
бы дать случайные результаты. Поэтому обычно для анализа гибридов F2
применяют несколько тест-клонов. Для этого очень удобно использовать
отрезки листа, помещенные в бензимидазол. В этом случае экспериментатор
получает возможность сопоставлять реакции каждого генотипа F2 не менее
чем к пяти тест-клонам паразита, что значительно уточняет анализ.
Популяцию F2 выращивают на слое ваты, смоченной водой. Для заражения
используют 7-8-дневные проростки. Перед началом работы подготавливают
небольшие кюветы (примерно 12 X 20 см). Число кювет соответствует числу
тест-клонов, имеющихся для анализа популяции F2. Дно кювет выстилают
ватой, смоченной бензимидазолом. t
Очередность операций при раскладке должна обеспечить строгую идентичность
положения отрезка листа каждого источника во всех кюветах. Для этого из
пучка срезанных листьев F2, помещенных в стаканчик с водой, берут один
произвольный лист, разрезают его на отрезки 1,5-2 см. Число отрезков
должно соответствовать количеству клонов паразита. По одному отрезку
помещают пинцетом в левый верхний угол каждой кюветы. Аналогично
поступают со всеми проростками и раскладывают отрезки вплотную друг к
другу в ряд. Между каждыми 10 отрезками в ряду помещают контрольные
отрезки листьев обеих родительских форм гибрида и чувствительного сорта.
Промежуток между отрезками листьев гибридов и контрольными отрезками
должен быть не менее 4-5 мм для того, чтобы облегчить сопоставление
реакций. Второй ряд укладывают вплотную к первому без интервала. Чем
плотнее уложены отрезки, тем меньше расход инокулюма. Таким образом, все
кюветы идентичны по составу и расположению отрезков, каждый отрезок при
этом представляет отдельное растение. Каждую кювету заражают определенным
клоном возбудителя из пульверизатора суспензией свежесобранных спор в
растворе Твина-80. Концентрация суспензии (5-10) * 103 спор/мл. На каждом
отрезке листа проявляется около 5-10 пустул. При использовании более
концентрированной суспензии тип реакции проявляется нечетко, при менее
концентрированной - часть чувствительных генотипов может оказаться
незараженной и соот-
372
ношение фенотипов в гибридной популяции будет искажено. Расход суспензии
составляет около 1-1,5 мл на каждые 10 см2. После заражения каждой кюветы
пульверизатор кипятят, готовят суспензию следующего клона и распыляют ее
на следующую кювету или следующую группу кювет, если несколько разных
популяций F2 заражают одним клоном. Результат учитывают на 8-9-й день
после заражения, оценивая реакцию растения на заражение по шкале
Стэкмена. Учет в более поздние сроки может привести к искажению
результатов, поскольку нарастающие в пустулах массы спор могут закрыть
узкие зоны хлорозов вокруг пустул. Вследствие этого часть реакций типа 2
может быть отнесена к типу 3. После оценки реакций экспериментатор
располагает характеристикой устойчивости каждого гибридного генотипа F2 к
