Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
на клеточном уровне изучают с помощью
следующих методических приемов:
1. Водную суспензию спор облучают определенной дозой УФ-лучей и через
разные промежутки времени высевают клеточную суспензию на питательную
среду и освещают видимым светом [185, 632]. Так, УФ-облученные на уровне
ЛД98 конидии непосредственно после облучения освещают видимым светом в
течение 10, 20, 40, 60, 120, 180, 240 и 300 мин [153]. Источник освещения
- лампа накаливания мощностью 300 Вт с зеркальным отражателем и водным
охлаждением. Стакан с суспензией конидий помещают на магнитную мешалку и
для предотвращения испарения закрывают кварцевой крышкой. Через указанные
промежутки времени из освещаемых образцов отбирают по 1 мл взвеси,
которую немедленно высевают и заливают теплой питательной средой. Посев
ведут только при красном свете (рис. 123). Кинетику процесса
фотореактивации определяют по увеличению выживаемости освещенных в
течение определенного времени УФ-облученных спор, которую выражают в
процентах по отношению к необлу-ченному контролю.
2. Выживаемость спор определяют после облучения последовательно
увеличивающимися дозами УФ-лучей и дальнейшего освещения их одной
определенной дозой видимого света [713, 763]. Способность к
фотореактивации является таксономическим признаком, достоверным на уровне
рода [763].
Темновое восстановление облученных одной дозой спор состоит в
выдерживании суспензии конидий в воде при температуре 25-27° С в течение
10, 20, 40, 60 мин и 2, 3, 4, 6, 24 и 48 ч. Выживаемость конидий,
высеянных через указанные промежутки времени, по сравнению с
выживаемостью необлученных конидий служит показателем темновой репарации.
Количественные данные, полученные при изучении фоторе-
Рис. 123. Схема установки для изучения действия света на грибы:
/ - лампа накаливания в кожухе, укрепленная на держателе; 2 - водный
фильтр (водное охлаждение); 3 - освещаемый образец (суспензия конидий
гриба); 4 - магнитная мешалка.
382
активации и темновой репарации, обрабатывают статистически. Результаты
выражают также графически в полулогарифмическом масштабе
XVI.3. ИОНИЗИРУЮЩИЕ ИЗЛУЧЕНИЯ
Ионизирующие излучения в качестве экстремального и мутагенного факторов
воздействия находят широкое применение в селекционной работе, при
изучении радиочувствительности организмов и их радиоза-щитных реакций.
XVI.3.1. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
Согласно современным представлениям все виды ионизирующих излучений можно
разделить на корпускулярные и электромагнитные [95, 113, 120, 137].
Корпускулярное излучение включает группу легких элементарных частиц -
электронов и позитронов - и тяжелых частиц - протонов, а-частиц,
нейтронов; к электромагнитным относятся рентгеновское (X) и гамма (у)-
излучения.
Электромагнитное излучение занимает область волнового спектра длиной 20-
0,001 А, область рентгеновских лучей расположена в пределах 0,06-20 А, у-
лучей- от lA и меньше. Рентгеновские и у-лучи имеют квантовую природу.
Энергия кванта УФ-света равна 3 эВ, рентгеновских лучей, применяемых для
диагностики,- 30 кэВ, гамма-квантов 60Со - 1,16 и 1,33 МэВ. С уменьшением
длины волны энергия квантов возрастает, что выражается зависимостью Е -
12400/Х эВ, где X - длина волны (А).
Физические свойства X- и у-лучей и, что особенно важно, их биологическое
действие на живые организмы одинаковы. При воздействии этих видов
излучения на вещество энергия последнего, поглощенная живой тканью,
распределяется в ней неравномерно. В результате можно наблюдать три
основных эффекта - комптоновский, фотоэлектрический и образование пар
электронов [120, 229, 486].
Ввиду того что указанные виды излучений вызывают образование ионов в
среде, подвергшейся облучению, они называются ионизирующими излучениями.
XVI.3.2. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ ДЕЙСТВИЯ ИОНИЗИРУЮЩИХ ИЗЛУЧЕНИЙ НА ГРИБЫ
XVI.3.2.1. ИСТОЧНИКИ ИЗЛУЧЕНИЯ, ПОГЛОЩЕННАЯ ДОЗА ОБЛУЧЕНИЯ, ЕДИНИЦЫ ЕЕ
ИЗМЕРЕНИЯ
Источником а-частиц обычно служит радиоактивный Ро. Нейтронное излучение,
будучи результатом некоторых ядерных реакций, как правило, получают в
атомных реакторах, у-кванты испускаются в ходе ядерных реакций и при
распаде многих радиоактивных веществ. Энергия у-лучей, образующихся при
распаде разных радиоактивных веществ, различна и достигает значений от
десятков тысяч до миллионов электрон-вольт. Для научно-исследовательской
работы и в медицинской практике в качестве источника у-квантов применяют
60Со, Х-лучи получают в
383
ионизационной трубке, откаченной до глубокого вакуума, источником
электронов в которой служит вольфрамовая спираль.
Единицей измерения дозы X- и у-излучений является 1 рентген - количество
излучения, при котором в 1 см3 воздуха образуется 2,1 X X 109 пар ионов,
несущих заряд в одну электростатическую единицу количества электричества
любого знака. Единицей поглощенной дозы является 1 рад, равный поглощению
1 г облучаемой среды 100 эрг энергии. Под мощностью, или интенсивностью,
дозы подразумевается количество энергии излучения, поглощаемое в единицу
