Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
раствором бензимидазола. При этом не прикрытые ватой части листьев
приподнимаются над стеклом. Отрезки листьев перед заражением опрыскивают
дистиллированной водой. Споры от отдельной пустулы переносят
микологическим крючком на отрезки листьев отдельной группы. Таким
образом, в одной чашке можно размножить споры шести клонов. В течение
суток зараженные чашки держат на рассеянном свету (так поступают в любом
случае после заражения), а затем помещают в светоустановку. Через 7-8
дней собирают споры, стряхивая их с помощью пинцета в отдельные пробирки
с каждых пяти отрезков. После посева спор каждого клона инструмент
стерилизуют в пламени горелки. Спор, полученных при таком размножении,
обычно достаточно для заражения набора тест-сортов. Для увеличения массы
рекомендуется смешать споры с тальком в такой пропорции, чтобы смесь
имела слегка розовый оттенок. Для получения большого количества спор,
например для индукции мутаций, оценки
362
Рис. 122. Размножение клонов возбудителя бурой ржавчины пшеницы в чашках
Петри.
агрессивности штаммов, неспецифической устойчивости сортов и т. д.,
пользуются газонами, приготовленными так, как показано на рис. 122. Здесь
листья восприимчивого сорта разложены не группами, а сплошными рядами.
Таким образом можно поддерживать коллекции музейных штаммов, размножая
споры каждого штамма в отдельной чашке.
XY.3.4. РАЗМНОЖЕНИЕ СПОР КЛОНОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ ГЕЛЬМИНТОСПОРИОЗОВ ЗЛАКОВ
Для тестирования клоков гриба по вирулентности к определенным наборам
сортов в лабораторных условиях достаточно одной чашки Петри со
спороносящей культурой каждого клона. Отдельные колонии отсевают на
наиболее подходящую для данного вида гриба среду. Следует иметь в виду,
что некоторые отсеянные клоны оказываются неспороносящими (для Drechslera
teres - 15-20%), а для инокуляции необходима только споровая суспензия
гриба. Поэтому рекомендуется отсевать на размножение большее количество
клонов, чем это необходимо для последующей работы.
363
XV.4. АНАЛИЗ ПОПУЛЯЦИЙ ПАРАЗИТОВ ПО ВИРУЛЕНТНОСТИ К ДИФФЕРЕНЦИРУЮЩИМ
НАБОРАМ ЛИНИЙ И СОРТОВ
В целях дифференциации клонов по вирулентности для возбудителя бурой
ржавчины используют набор изогенных линий, полученных на основе сорта
Thatcher. Эти линии были выведены в Канаде скрещиванием сорта Thatcher с
различными сортами - источниками генов устойчивости - с последующими 6-7-
кратными беккроссами. В настоящее время существует более 20 изогенных
линий этой серии.
Анализ вирулентности клонов к изогенным линиям дает представление о
концентрации соответствующих генов вирулентности в популяциях. При
отсутствии изогенных линий популяции патогенов дифференцируют на наборах
сортов-дифференциаторов. Из возбудителей гель-минтоспориозов зерновых
анализ популяций по вирулентности впервые был проведен с возбудителем
сетчатой пятнистости ячменя. В результате были отобраны 7 (из 26) сортов
с четко различающимися реакциями на заражение отдельными клонами.
ХУ.4.1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИРУЛЕНТНОСТИ КЛОНОВ
ВОЗБУДИТЕЛЯ БУРОЙ РЖАВЧИНЫ ПШЕНИЦЫ
К НАБОРУ ИЗОГЕННЫХ ЛИНИЙ
Проростки изогенных линий выращивают на вате, периодически смачиваемой
водой. Для заражения используют проростки в стадии первого развернутого
листа. Отрезки листьев проростков раскладывают в кюветы, дно которых
выстлано слоем ваты, смоченной раствором бензимидазола. Эту процедуру
осуществляют следующим образом: 5-6 листьев каждой линии, сложенных
вместе, разрезают на отрезки длиной 1-1,5 см столько раз, сколько
позволяет длина листьев, складывают в столбики на расстоянии 1-1,5 см
друг от друга. Столбики всего набора линий располагают в один
горизонтальный ряд. В кювету размером 30 X 40 см можно поместить 30
наборов. Перед заражением кювету
Таблица 28. Частота встречаемости клонов, авируленгных к моногенным
линиям серии Thatcher в грузинской популяции Puccinia recondita, %
Чис- Гены устойчивости линии Thatcher
Сорт ло кло- нов 1 2 А ЗА 3 д 10 14 16 17 18
Шавпха Ахалцихис цители 143 93,7 93,7 2,8 6,3 0 2,8 0
11,2 10,5
доли 112 58,9 59,8 3,6 4,5 3,6 0 0 1,8 2,7
Доли 35/4 148 39,9 39,9 7,4 5,4 2,7 1,3 0,7 12,8 8,8
Арагви 182 46,7 45,0 3,3 0 1,6 0 0 13,2 11,5
Безостая 1 157 43,9 43,9 0 0 1,9 0,6 0 1,9 0,6
Кавказ Лагодехис грдзел- 132 15,1 10,2 1,3 0 1,3 0 0
0 0
тавтава 163 11,6 11,6 3,1 1,2 4,9 2,4 0 1,8 1,2
364
опрыскивают дистиллированной водой. Отрезки листьев каждого набора линий
заражают сухими спорами отдельного клона, смешанными с тальком. Для
нанесения спор используют микробиологическую иглу. Кювету после заражения
вновь осторожно опрыскивают водой из пульверизатора и закрывают стеклом.
Через сутки ее ставят в светоустановку. На 8-9-й день отмечают реакцию на
заражение патогеном каждой линии (0, 1, 2, 3, 4, X) по шкале Стэкмена-
Левина [779]. Для упрощения учета реакции 0, 1, 2 обозначают R, 3, 4, X -
5 [210]. Описанный способ позволяет за короткое время определить
вирулентность большого количества клонов популяции (табл. 28).
