Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
XV.4.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИРУЛЕНТНОСТИ КЛОНОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕТЧАТОЙ ПЯТНИСТОСТИ
ЯЧМЕНЯ К НАБОРУ СОРТОВ-ДИФФЕРЕНЦИАТОРОВ
Для приготовления споровой суспензии в чашки Петри приливают 10 мл 0,0001
%-ного раствора Твина-80 в дистиллированной воде; полученную суспензию
фильтруют через два слоя марли. Для возбудителя сетчатой пятнистости
оптимальная концентрация суспензии 5000 спор/мл. При использовании более
концентрированных суспензий (30 000-100 000 спор/мл) тип реакции на
некоторых сортах изменяет-
Таблица 29. Схема идентификации рас Drechslera teres
Сорта-дифференциаторы по каталогу ВИР *
К 25 270 I К 25 282 | К 25 275 | К 8755 | К 19 282 | К 18
474 | К 19 467
Номер расы Сорта-дифференциаторы по 1 системе Хабгуда
2е 25 2* 2" 22 21 2°
64 32 16 8 4 2 1
4 У У У У В У У
38 У в У У в в У
100 в в У У в У У
Примечание. У - устойчивость, В - восприимчивость сорта-дифференциатора.
* Всесоюзный институт растениеводства им. Н. И. Вавилова ВАСХНИЛ.
ся в сторону восприимчивости. Отрезки листьев каждого тест-набора,
расположенные в ряд, инокулируют отдельными клонами, нанося пастеровской
пипеткой по 0,02-0,03 мл споровой суспензии гриба. Через сутки после
инокуляции кювету накрывают стеклом и помещают в светоустановку.
Реакцию сорта на заражение патогеном учитывают на 4-5-е сут после
инокуляции по четырехбалльной шкале: 1 - высокоустойчивый (точечные
некрозы без хлороза); 2 - относительно устойчивый (некротические
коричневые пятна с хлоротичным окаймлением или без хлороза, не
распространяющиеся по отрезку листа); 3 - восприимчивый (некротические
пятна с хлорозом, распространяющиеся по отрезку листа); 4 -
высоковосприимчивый (некротизирован весь отрезок листа).
365
Балл 0 в предлагаемой шкале отсутствует, поскольку абсолютно непоражаемых
сортов при лабораторном методе инокуляции выявить не удалось. Реакции
растения, оцененные баллами 1 и 2, соответствуют устойчивости, баллами 3
и 4 - восприимчивости. При обработке полученных данных учитывают
количество и частоту встречаемости рас, а также концентрацию вирулентных
клонов к отдельным сортам-дифференциаторам в различных популяциях
возбудителя. Зарегистрированные расы удобно нумеровать по методу Хабгуда
[605]. При этом сорта-дифференциаторы располагаются в строго определенном
порядке
Таблица 30. Сравнительная характеристика популяций по признаку
вирулентности (популяции собраны с сорта Фаворит), %
Сорт-дифференциатор по каталогу ВИР Количество вирулентных клонов в
популяциях Сравнение популяций
ленин- градской москов- ской латвий- ской ленинградской и
московской ленинградской и латвийской московской и латвийской
К 25 270 24,2 15,6 29,2 0,86 0,40 1,17
К 25 282 27,3 28,1 66,7 0,07 3,12 3,03
К 25 275 0 0 0 0 0 0
К 8 755 9Д 28,1 16,2 1,99 0,81 1,02
К 19 282 27,3 28,1 66,7 0,07 3,13 3,03
К 18 474 36,4 59,4 70,8 1,88 2,71 0,88
К 19 467 6,1 18,7 25,0 1,55 1,90 0,55
Примечание: р > 0,95 при ^ 1,96.
и каждому сорту присваивают бинарный номер от 2° до 2е. Для определения
номера расы достаточно сложить числа бинарных сортов, которые проявляют
реакцию восприимчивости к данной расе (табл. 29). Так, например, раса 4
вирулентна только к образцу К 19 282, бинарный номер которого - 4, а раса
38 вирулентна к образцам К 25 282, К 19 282, К 18 474 (32 + 4 + 2). Таким
образом, номер расы становится информативным. Его можно расшифровать и
определить, какие сорта-дифференциаторы поражаются данной расой. Для
этого нужно 2 возвести в максимальную степень, чтобы сумма полученных
чисел составляла номер расы. Например, раса 100 = 26 + 24 + 22 = 64 + 32
+ 4, т. е. раса 100 вирулентна к сортам с бинарными номерами 64, 32, 4.
На основании данных о количестве вирулентных клонов к отдельным сортам-
дифференциаторам можно определить сходство или различие определенных
популяций возбудителя болезни (табл. 30).
XV.5. ИССЛЕДОВАНИЕ МУТАЦИОННОГО ПРОЦЕССА
Появление спонтанных и индуцированных мутантов - весьма редкое явление.
Для их выделения и определения частоты встречаемости необходимы методики,
имеющие большую разрешающую способность. Методика рассева спор на газоны
облегчает эту задачу.
366
XV.S.1. ВЫДЕЛЕНИЕ СПОНТАННЫХ ВИРУЛЕНТНЫХ МУТАНТОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ БУРОЙ
РЖАВЧИНЫ ПШЕНИЦЫ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧАСТОТЫ ИХ ВСТРЕЧАЕМОСТИ В ПОПУЛЯЦИИ
Для выделения редких вирулентных форм из природной популяции (спонтанных
мутантов) готовят газоны из листьев устойчивого сорта, служащего
селективным фоном, а также из листьев универсально восприимчивого сорта.
По 0,5 мл суспензии спор природной популяции рассеивают пульверизатором
из мерной пробирки на каждый газон. Через
7-8 дней подсчитывают число пустул на газонах обоих сортов. Коли-
Таблица 31. Частота встречаемости клонов, вирулентных к сортам Аврора и
Кавказ, в дагестанской популяции возбудителя бурой ржавчины пшеницы
Год Сорт Число проанализированных клонов Частота встречаемости
1969 Аврора 17 550 I х 1 о-4
Кавказ 14 550 I X 10_3
1970 Аврора 17 800 бхю-5
