Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Билай В.И. -> "Методы экспериментальной микологии " -> 177

Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.

Билай В.И. Методы экспериментальной микологии — К.: Наукова думка, 1982. — 552 c.
Скачать (прямая ссылка): metodiexpirementalnoymikologii1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 171 172 173 174 175 176 < 177 > 178 179 180 181 182 183 .. 279 >> Следующая

сорта, т. е. сорта, вссприимчиЕого практически ко всем клонам популяции.
Чашки Петри, приготовленные таким сбразом, называются газонами (рис.
121). На газоны распыляют споры популяции, суспензированные в 0,0001% -
ном растворе детергента Твин-80. Распыление производят пульверизатором из
мерной прсбирки не более чем по 0,5 мл суспензии на газон. В течение
суток газоны выдерживают на рассеянном свету, затем на дно чашек
осторожно приливают примерно 20 мл 0,004% -ного водного раствора
бензимидазсла и помещают их на свету под лампами дневного света ЛДЦ.
Интенсивность освещения на рабочей поверхности 2500-3000 лк. Температура
культивирования не должна превышать 25° С. Пустулы бурой ржавчины
появляются на 6-7-й день. Если суспензия для рассева тщательно
приготовлена и не содержит комков, то с большой долей вероятности можно
считать, что каждая пустула (колония) произошла от одной споры, а споры,
содержащиеся в пустуле, одинаковы по генотипу и представляют собою клон.
XY.3.2. ВЫДЕЛЕНИЕ КЛОНОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ СЕТЧАТОЙ ПЯТНИСТОСТИ ЯЧМЕНЯ
Выделение грибов - факультативных паразитов - в чистую культуру можно
проводить как из зеленых, так и из сухих листьев растений. В частности,
мицелий гельминтоспориозов злаков сохраняет жизнеспособность в течение
нескольких лет. Существует несколько способов изо-
360
ляции грибов из пораженных растений. Самый простой из них заключается в
стерилизации поверхности пораженных листьев в дезинфицирующих растворах
(спирта, медного купороса, гипохлорита кальция и др.) и помещении их во
влажную камеру. Образующиеся через несколько дней на пораженных участках
споры гриба сухой иглой переносят на агаровую среду. При выделении гриба
в чистую культуру непосредственно на среду из пораженных листьев вырезают
участки размером (5-2) X (5-2) мм, стерилизуют их в 2%-ном растворе
медного купороса в течение 2-3 мин и промывают 2 раза в стерильной воде.
Затем ку-
Рис. 121. Газон из листьев пшеницы.
сочки листьев высушивают стерильной фильтровальной бумагой и раскладывают
в чашки Петри на поверхность агаровой среды. Состав среды зависит от вида
гриба. В частности, при выделении Drechslera teres и Helminthosporium
sativum применяют среду Чапека в модификации Бенкена и др. [36]. Чашки
Петри помещают в светоустановку с лампами типа ЛДЦ. Через 4-7 сут, в
зависимости от вида гриба, на кусочке ткани листа и .среде появляется
мицелий с конидиальным спороно-шением.
Культивирование грибов родов Drechslera и Helminthosporium на свету (5-7
сут), а затем в темноте (24-48 ч) при температуре 18- 20° С обеспечивает
обильное конидиальное спороношение. Все изоляты, представляющие
определенную популяцию гриба, отсеивают в пробирки на косяки агара и
хранят в холодильнике при температуре 4° С. Однако
361
хранение культуры даже в течение нескольких месяцев меняет ее патогенные
характеристики. Поэтому при необходимости получения спорового материала,
представляющего популяцию гриба, рекомендуется повторное выделение
возбудителя из пораженных листьев.
При клонировании популяции можно использовать споровый материал,
полученный при первичной изоляции гриба из пораженных листьев. В случае
даже незначительного загрязнения культуры необходим пересев популяции на
ту же среду. Для получения клонов гриба споры с поверхности агара
собирают микробиологической лопаткой и готовят суспензию в стерильном
0,0001%-ном растворе Твин-80. Суспензию отфильтровывают в случае крупных
спор (например, грибов родов Dre-chslera и Helminthosporium) сначала
через один, а затем через два слоя марли, подсчитывают количество спор в
камере Горяева и разводят исходную суспензию до 1000-2000 спор/мл. По
0,05 мл подготовленной суспензии вносят микробиологической пипеткой в
чашку с питательной средой и равномерно распределяют ее по поверхности
агара, растирая каплю шпателем.
Для грибов рода Drechslera характерно образование в культуре обильного
воздушного мицелия, который препятствует получению отдельных колоний
гриба. Для образования компактных колоний в среду добавляют вещества,
ограничивающие рост гриба, такие, как натриевая соль дезоксихолиевой
кислоты, свекловичный пектин, тритон, медицинская желчь и др. Применение
автоклавированной медицинской желчи (20 мл/л среды) обеспечивает
получение несрастающихся (0,5-1 см в диаметре) колоний гриба. Через 5-8
дней каждую колонию отсеивают в пробирку на косяки агара или в чашку
Петри для получения спорового материала.
XV.3.3. РАЗМНОЖЕНИЕ СПОР КЛОНОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ
БУРОЙ РЖАВЧИНЫ ПШЕНИЦЫ
Наиболее пригодны для отсева пустулы с газонов на 8-й день после
заражения. Для размножения спор одного клона (из одной пустулы)
используют отрезки листьев проростков того же универсально восприимчивого
сорта. Отрезки длиною 2,5-3 см раскладывают в чашки Петри на два
предметных стекла, помещенных на дно чашки. На каждое стекло кладут по
три группы отрезков, по 5 в каждой группе. Части отрезков, выходящие за
пределы предметного стекла (длиной 0,5-1 см), прикрывают ватой, смоченной
Предыдущая << 1 .. 171 172 173 174 175 176 < 177 > 178 179 180 181 182 183 .. 279 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed