Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
Кавказ 11 600 1X Ю"3
чество пустул на газонах восприимчивого сорта служит показателем числа
проанализированных особей. С помощью этой методики выделены спонтанные
мутанты, вирулентные к сортам Аврора и Кавказ, из дагестанской популяции
возбудителя бурой ржавчины в годы, когда популяция не имела контакта с
названными сортами. Частота встречаемости мутантов показана в табл. 31.
ХУ.5.2. ПОЛУЧЕНИЕ ИНДУЦИРОВАННЫХ МУТАНТОВ
ВОЗБУДИТЕЛЯ БУРОЙ РЖАВЧИНЫ ПШЕНИЦЫ
Мутации по признаку вирулентности и морфологическим признакам были
получены у нескольких видов ржавчинных грибов под действием облучения УФ,
рентгеновскими лучами и в результате воздействия химическими мутагенами.
Обработка спор Ы-нитрозо-Ы-метил-мочевиной (НММ) наиболее эффективна.
ХУ.5.2.1. ОБРАБОТКА СПОР ХИМИЧЕСКИМИ
МУТАГЕНАМИ НА ПРИМЕРЕ
И-НИТРОЗО-И-МЕТИЛМОЧЕВИНЫ
НММ растворяют в фосфатном буфере при pH 4,7-5,2 с добавлением Твина-80.
Раствор мутагена приливают к сухим спорам в пробирку и энергично
размешивают их стеклянной палочкой для получения гомогенной суспензии.
Для удаления мутагена и промывания спор используют фильтр Зейтца с двумя
прокладками обычной фильтровальной бумаги и одного мембранного фильтра
(синпор) с порами разме-
367
ром 2,5 мкм и более. Фильтр Зейтца помещают в колбу Бунзена. После
обработки мутагеном суспензию фильтруют. Мутаген удаляют, отсасывая
жидкость насосом. Затем споры промывают несколькими порциями
дистиллированной воды.
XV.5.2.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ЖИВЫХ СПОР,
ВЫСЕЯННЫХ НА ГАЗОН
Промытые споры смывают раствором Твина-80 а мерную пробирку и
подсчитывают их концентрацию. После этого по 0,5 мл суспензии высевают на
газоны из листьев устойчивого и универсально восприимчивого сорта. Так же
поступают с порцией контрольных, необработанных мутагеном спор того же
штамма, высевая их менее концентрированную суспензию. Каждую суспензию
наносят каплями на предметные стекла, на поверхность которых налит слой
2%-ного водного агара. Через сутки подсчитывают количество живых
проросших спор. Таким образом, зная объем и концентрацию высеянной
суспензии, количество живых спор в ней, можно подсчитать количество живых
спор, нанесенных на каждый газон.
XV.5.2.3. УЧЕТ ВЫЖИВАЕМОСТИ СПОР И ЧАСТОТЫ
ПОЯВЛЕНИЯ МУТАНТОВ
Число пустул, появившихся на газоне по прошествии латентного периода,
выраженное в процентах числа посеянных живых спор, служит показателем
эффективности клонирования штамма (ЭК). Сравнение ЭК обработанных и
необработанных мутагеном спор, дает представление о выживаемости спор,
обработанных мутагеном. При сравнении числа пустул, появившихся на
устойчивом сорте и в контрольных чашках восприимчивого сорта, можно
узнать частоту возникновения вирулентных мутантов. Если на газонах
восприимчивого сорта окажутся мутанты по морфологическим признакам
(пустулы с измененной окраской) или мутанты по признакам агрессивности
(продолжительность латентного периода, размеры пустул), то частоту их
появления можно подсчитать, соотнося их количество с количеством пустул
на контрольных газонах. Посев необработанной суспензии предпринимается
также для выявления частоты спонтанного возникновения мутантов. Пользуясь
описанной методикой, можно установить зависимость выживаемости спор от
дозы мутагена и частоту возникновения мутантов.
XV.5.2.4. ОБРАБОТКА СПОР УФ-ЛУЧАМИ
Для обработки УФ-лучами можно использовать как сухие споры, занесенные
очень тонким слоем на бумагу, так и суспендированные в'растворе Твина-80.
Облучение производят лампами БУВ.
XV.6. ОЦЕНКА СОРТОВ РАСТЕНИЙ-ХОЗЯЕВ НА УСТОЙЧИВОСТЬ
Существует два вида специфической устойчивости: проростковая, которая
проявляется на всех фазах онтогенеза, и устойчивость взрослых растений,
проявляющаяся в фазе флаг-листа. Прюростковую устойчивость можно оценить
в лаборатории, устойчивость взрослых растений целесообразно учитывать в
поле. Инфекционным материалом для оценки
368
устойчивости на первом этапе должны быть природные популяции или
представительные выборки клонов из них. Оценка устойчивости к природным
популяциям позволяет разделить сорта на устойчивые и восприимчивые к
конкретным популяциям паразитов. Количественно эффективность источника
устойчивости против данной популяции паразита определяют подсчетом числа
клонов в природной популяции паразита (в процентах), авирулентных к
источнику устойчивости. Эффективность 90% и выше считается приемлемым
уровнем для селекционного использования источника устойчивости.
ХУ.6.1. ОЦЕНКА СПЕЦИФИЧЕСКОЙ УСТОЙЧИВОСТИ
СОРТОВ ПШЕНИЦЫ К ВОЗБУДИТЕЛЮ БУРОЙ РЖАВЧИНЫ
Специфическую устойчивость, детерминированную генами устойчивости,
эффективными в течение всего онтогенеза растений, определяют на
проростках в стадии первого развернутого листа. Проростки выращивают на
вате, периодически обильно смачиваемой водой. Семена сеют группами с
соответствующими этикетками для каждой группы. В одной кювете размером 30
X 40 см можно вырастить проростки 25 сортов. Для оценки необходимо иметь
