Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
Исследователи разных стран работали с разными панелями сывороток и клеток, что привело к возникновению различной терминологии. К счастью, были проведены серии рабочих совещаний, во время которых происходили обмен реактивами и параллельное тестирование на различных панелях клеток. В задачу таких совещаний входили стандартизация определения специфичностей HLA и выработка единой номенклатуры HLA.
Определение специфичностей HLA обычно включает в себя тестирование реактивными сыворотками большой панели клеток. Реакции каждой сыворотки с образцами клеток (компонентами панели) оценивают как положительные или отрицательные, затем с помощью компьютера вычисляют конкордантность (совпадение реакций) разных сывороток. Группе сывороток, имеющих высокую степень конкордантности по критерию %2 (т. е. выявляющих одинаковую специфичность или группу специфичностей), присваивают номер специфичности; полученные сыворотки сохраняют как стандарт сравнения для определения этой специфичности. Схематический пример такого анализа на панели клеток 18 неродственных доноров показан на рис. 13.14 [76]. Такая форма представления результатов тестирования панели была характерна для раннего этапа серологических исследований. С помощью этого теста было обнаружено пять различных вариантов реактивности, обусловливающих пять серо-
логических специфичностей: сыворотки 1, 2 3 и 4 выявляют специфичность, общую для доноров А-I. Кроме того, сыворотка 3 выявляет дополнительную специфичность донора J, с которой реагируют также сыворотки 8 и 9 и т. д. В эток тесте конкордантность некоторых сывороток, например 1—4, легко определяется визуально. Однако в случае тестирования большего числа образцов сывороток и клеток на панелях большего размера вместо визуальной оценки используется компьютерный анализ.
В первых исследованиях по скринингу все выявленные специфичности относились к продуктам класса I. Это объясняется тем, что анализ, как правило, проводили на лимфоидных популяциях периферической крови, в которых
Рис. 13.14. Типирование лимфоцитов человека. Схематическое изображение результатов тестирования панели, состоящей из 10 сывороток многорожавших женщин, на лимфоцитах-мишенях от 18 разных доноров. Визуальная оценка позволяет отметить пять отличных друг от друга вариантов реактивности.
Тестируемые сыворотни 1 23456789 10
Положительный | j Отрицательный '
результат
результат
преобладают Т-лимфоциты. В начале 70-х годов стало очевидным, что специфичности можно разделить на две серии, HLA-A и HLA-В, таким образом, что индивидуум наследует от каждого из родителей не более одной специфичности из каждой серии. В начале 70-х годов была открыта еще одна, самостоятельная серия специфичностей класса I, HLA-С, обладающая гораздо меньшим полиморфизмом. Вскоре после этого была обнаружена серия аллоантигенов В-кле-ток, кодируемая генами, сцепленными с HLA. Эти антигены, получившие название HLA-DR, представляют собой продукты локусов класса II человека. Серология продуктов классов I и II детально рассматривается ниже в этой части. Здесь мы упоминаем их для того, чтобы показать, какой сложный анализ необходимо было произвести для определения специфичностей каждого из этих локусов методом серологического скрининга. Очевидно, что лишь путем объединения усилий и взаимной договоренности между исследователями этой области удалось разработать адекватную панель сывороток для работы по определению серологии HLA.
13.5.1.2. Генетический анализ
Ввиду крайнего полиморфизма, свойственного каждому из локусов HLA, практически все члены такой аутбредной популяции, как человек, гетерозиготны по большинству, если не по всем локусам HLA. Поэтому, если у инбредных мышей генотип можно непосредственно определить типированием индивидуальных животных, при генетическом анализе сцепления у человека необходимо типировать параметры расщепления в семье. Поскольку частота рекомбинаций в пределах МНС сравнительно мала, можно в целом принять, что группы отличных друг от друга аллелей в различных сцепленных с HLA локусах, сегрегирующие вместе, представляют собой одну группу сцепления и составляют гаплотип. На рис. 13.15 приведена общая схема наследования HLA. Как показано на рисунке, если обозначить четыре интересующие нас хромосомы буквами а, Ь, с, d, то потомство можно будет отнести к одной из четырех возможных категорий. Иначе говоря, следует ожидать, что частота любого из четырех возможных генотипов в потомстве составит 25%. Последнее положение важно в клиническом аспекте, поскольку оно указывает, что любой сибс больного, нуждающегося в трансплантации, с вероятностью 25% будет иметь идентичный с ним набор антигенов HLA (т. е. будет идентичным по HLA донором). Поэтому при типировании HLA у членов одной семьи в клинических целях, как правило, достаточно, чтобы каждую из родительских хромосом, несущих гены МНС, можно было отличить по какому-либо одному маркеру. После этого можно надеяться, что если два сибса конкордантны по этим маркерам, то между ними существует идентичность по всему комплексу МНС. Характерный пример типирования HLA среди членов семьи представлен в табл. 13.16. Для получения информации о распределении генотипов в данной семье достаточно провести типирование по одному из многих полиморфных локусов, поскольку оба родителя были типированы по двум четко определяемым аллелям в каждом из локусов.
