Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
уменьшающие амплитуду световой волны. На оправе фазовых объективов
обозначен дополнительный буквенный индекс "Ф": Ф-10, Ф-20, Ф-40и ФОИ-90.
2. Фазовый конденсор с револьвером специальных кольцевых диафрагм для
каждого объектива. Индексом "О" обозначено отверстие для наблюдения
препарата обычным методом с ирисовой диафрагмой.
3. Вспомогательный микроскоп малого увеличения, которым заменяют окуляр
при наблюдении за центровкой освещения.
Прн фазово-контрастной микроскопии используют осветители типа ОИ-7 или
ОИ-19.
Люминесцентная (или флюоресцентная) микроскопия.
Основана на явлении фотолюминесценции (рис. 9).
Люминесценция (от lumen - свет) - свечение веществ, возникающее после
воздействия на них каких-либо источников энергии: света, электронных
лучей, ионизирующего излучения. Фотолюминесценция - люминесценция объекта
под влиянием света. Свет люминесценции имеет большую длину волны, чем
свет возбуждающий, поэтому возбуждают люминесценцию коротковолновыми
лучами. Если освещать люмннесцирующий объект синим светом, то он
испускает лучи красного, оранжевого, желтого или зеленого цвета. В
результате возникает цветное изображение объекта Длина волны излучаемого
света (цвет люминесценции) зависит от физико-химической структуры
люминесцирующего вещества.
Первичная (собственная) люминесценция наблюдается без предварительного
окрашивания объекта, вторичная (наведенная) возникает после окраски
препаратов специальными люминеспирующими красителями-ф лю орох рома-м и.
Люминесцентная микроскопия по сравнению с обычными методами обладает
рядом преимуществ:/возможностью исследования живых микроорганизмов и
обнаружения их в исследуемом материале в небольших концентрациях
вследствие высокой степени контрастности.
В лабораторной практике люминесцентная микроскопия широко применяется для
выявления и изучения многих микроорганизмов.
Электронная микроскопия. Позволяет наблюдать объекты, размеры которых
лежат за пределами разрешающей способности светового микроскопа (0,2
мкм). Электронный микроскоп
перемещения коллектора; 14 - рукоятка полевой диафрагмы; 15 - крышка
гнезда светофильтров; 16 - винты пентрировки полевой диафрагмы; 17 -
макрометрический винт; 18 - микрометрический винт; 19 - оправа
коллектора; 20 - коробка с механизмами грубого и тонкого перемещения
препарата; 21 - винт для крепления насадки; 22 - винты для центрировки
полевой диафрагмы; 23 - бинокулярная насадка; 24 - рукоятка тормоза
грубого движения; 25 - рукоятка переключения освещения; 26 - рукоятка для
перемещения препарата в горизонтальной плоскости; 27 - защитная втулка;
28 - корпус ртутной лампы; 29 - кювета с дистиллированной водой.
15
о
Рис. 10. Электронный микроскоп.
0 -общий вид; б-схема колонки: / - ручка для регулировки юстирующего
устройства;
1 - устройство, фиксирующее пучок электронов; 3 - камера для сеток, на
котором помещаются исследуемые объекты; 4 - противозап>яэнительное
устройство; 5 - диафрагма объективной линзы; 6 -диафрагма поля зрения; 7
- бинокулярная лупа; 8 - флюоресцентный экран; 9 - электронная пушка; 10
- конденсорные линзы; //- устройство, фокусирующее пучок электронов; 12 -
стигматор объективной линзы; 13 - объективная линза; /•/ - промежуточные
линзы; 15 - проекционная линза; 16 - фотоэкспонометр; /7 -фотокамера.
применяется для изучения вирусов, тонкого строения различных
микроорганизмов, макромолекулярных структур и других субмикроскопических
объектов (рис. 10). Световые лучи в таких микроскопах заменяют поток
электронов, имеющий при определенных ускорениях длину волны около 0,005
нм, т. е. почти в 100000 раз короче длины волны видимого света. Высокая
разрешающая способность электронного микро-
16
скопа, практически составляющая 0,1-0,2 нм, позволяет получить общее
полезное увеличение до 1000000 раз.
Наряду с приборами "просвечивающего" типа используют сканирующие
электронные микроскопы, обеспечивающие рельефное изображение поверхности
объекта. Разрешающая способность этих приборов значительно ниже, чем у
электронных микроскопов "просвечивающего" типа.
Методические указания
Работа с любым микроскопом состоит из правильной установки освещенности
поля зрения и препарата и его микроскопии разными объективами. Освещение
может быть естественным (дневным) или искусственным, для чего используют
специальные источники света, например осветитель ОИ-7.
При микроскопии препаратов с иммерсионным объективом следует строго
придерживаться определенного порядка в работе: 1) на приготовленный и
окрашенный мазок нанести небольшую каплю иммерсионного масла и поместить
препарат на предметный столик (укреплять зажимами не обязательно);
2) повернуть револьвер до отметки иммерсионного объектива 90; 3)
осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю
масла; 4) установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического
винта; 5) провести окончательную фокусировку препарата микрометрическим
винтом, вращая его в пределах только одного оборота. Нельзя допускать
