Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
довольно сложную структуру, определяющую многообразие их функциональной
деятельности. Для бактерий характерны четыре основные формы: сферическая
(шаровидная), цилиндрическая (палочковидная), извитая и нитевидная (рис.
11).
Бактерии шаровидной формы -кокки -в зависимости от плоскости деления и
расположения отдельных особей подразделяются на микрококки (отдельно
лежащие кокки), диплококки (парные кокки), стрептококки (цепочки кокков),
стафилококки (имеющие вид виноградных гроздьев), тетракокки (образования
из четырех кокков) и сарцины (пакеты из 8 или 16 кокков).
Палочковидные бактерии располагаются в виде одиночных клеток, дипло- или
стрептобактерий.
Извитые формы бактерий-вибрионы и спириллы, а
20
также спирохеты. Вибрионы имеют вид слегка изогнутых палочек, спириллы -
извитую форму с несколькими спиральными завитками.
Размеры бактерий колеблются от 0,1 до 10 мкм. В состав бактериальной
клетки входят капсула, клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана и
цитоплазма, в которой содержатся нуклеоид, рибосомы и включения (рис.
12). Некоторые бактерии снабжены жгутиками (рис. 13) и ворсинками. Ряд
бактерий образуют споры, которые располагаются терминально,
субтерминально или центрально (рис. 14); превышая поперечный размер
клетки, споры придают ей веретенообразную форму.
Для изучения морфологии бактерий из них готовят нативные (прижизненные)
препараты и фиксированные мазки, которые окрашивают анилиновым
красителем. В основе окраски лежат сложные химические и физико-химические
реакции. Протоплазма бактерий, особенно в фиксированных мазках, обладает
сродством к основным красителям. Поэтому для их окраски используют
главным образом основные красители: метиленовый синий, кристаллический
фиолетовый, везувин и др. Для выявления различных структурных элементов в
бактериальной клетке применяют нейтральные и кислые краски.
v Различают простые и сложные методы окраски (по Граму, Цилю -Нельсену и
др.). Последние имеют дифференциальнодиагностическое значение. Отношение
микроорганизмов к красителям расценивают как тинкториальные свойства.
¦V'A
U#- Ал *s
*
*
Рис. 13. Жгутики бактерий (схема).
о - монотрих; б - лофотрих; в - амфитрих; г - перитрих.
Рис. 14. Споры бактерий (схема).
а - терминальное расположение; б г- субтер-мииальное; в - центральное.
2!
Рис. 15. Актиномицеты.
Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления
жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических
включений.
Актиномицеты (Actinomyces) относятся к порядку Actinomy-cetales. Клетки
актиномицетов обычно имеют вид длинных и ветвящихся нитей (рис. 15),
напоминающих в ряде случаев мицелий одноклеточных грибов, но встречаются
также палочковидные и кокковидные формы. Нити мицелия имеют длину 100-600
мкм и толщину 0,2-1,2 мкм. Актиномицеты размножаются спорами, поперечным
делением и почкованием. Они не имеют выраженной капсулы, жгутиков и
ворсинок. Как и другие бактерии, актиномицеты окрашиваются анилиновыми
красителями. Обычно их окрашивают простыми методами или по Г раму.
Актиномицеты являются грамположительными микроорганизмами.
Программа занятия
1. Формы бактерий и методы их изучения.
2. Ультраструктура бактериальных клеток (изучение электронно-
микроскопических фотографий).
3. Простые и сложные методы окраски.
Демонстрация
1. Методика приготовления мазков из бактериальных культур и их окраска.
2. Различные морфологические формы бактерий в препаратах-мазках,
окрашенных простыми методами.
3. Подвижность бактерий в препарате "висячая" капля.
4. Мазок из смеси бактерий. Окраска по Г раму
5. Препарат актиномицета. Окраска по Граму.
6. Мазок из чистой культуры капсульных бактерий. Окраска по Бурри -Гинсу.
7. Мазок из чистой культуры дрожжей, содержащих зерна волютина. Окраска
по Нейссеру.
8. Мазок из чистой культуры спорообразующих бактерий. Окраска по методу
Ожешки.
9. Мазок из чистой культуры кислотоустойчивых бактерий. Окраска по Цилю -
Нельсену.
10. Методика определения размеров микробной клетки с техникой градуировки
окулярного микрометра по объект-микрометру.
И. Структурные компоненты бактериальной клетки на электронно-
микроскопических фотографиях.
Задание для выполнения лабораторной работы
1. Определить форму клеток неизвестной бактериальной культуры, используя
простой метод окраски.
2. Определить форму клеток и отношение к окраске по Граму разных
бактерий, содержащихся в исследуемой смеси бактериальных культур.
3. Определить наличие спор, зерен волютина и кислотоустойчивость
исследуемой бактериальной культуры, используя соответствующие методы
окраски.
4. Определить подвижность исследуемых бактерий. Составить протокол и
сделать заключение по результатам проведенных исследований (см. табл. 1).
Методические указания
Приготовление препаратов для микроскопического исследования.
Взятие материала для исследования. Для приготовления препарата
исследуемый материал берут из пробирки, колбы или чашки Петри
