Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
соприкосновения объектива с препаратом, так как это может повлечь поломку
препарата или фронтальной линзы (свободное расстояние иммерсионного
объектива 0,1-1 мм). '
По окончании работы микроскопа необходимо специальной тряпочкой тщательно
вытереть масло с иммерсионного объектива и перевести револьвер на малый
сухой объектив 8.
Техника фазово-контрастной микроскопии. 1.Установить в микроскоп фазовый
конденсор и соответствующий фазовый объектив. Револьвер конденсора
поставить в положение "О". 2. Поместить препарат на предметный столик. 3.
Установить освещение так, чтобы четкое изображение нити электролампы
находилось в плоскости полностью открытой ирис-диафрагмы конденсора. 4.
Заменить окуляр вспомогательным микроскопом МИР-4 и перемещением его
окуляра сфокусировать фазовое кольцо объектива до получения четкого
темно-серого изображения. 5. Установить диафрагму в соответствии с
фазовым объективом. В поле зрения появляется светлое кольцо диафрагмы.
6. С помощью центрировочных винтов конденсора полностью совместить
светлое и темное кольца. 7. Заменить вспомогательный микроскоп окуляром и
микроскопировать препарат. 8. При смене объектива или препарата вновь
проверить центрировку кольцевой диафрагмы с фазовым кольцом. Правильное
18
выполнение всех условий обеспечивает достаточно высокую контрастность
изображения.
Техника темнопольной микроскопии. 1. Заменить обычный конденсор в
микроскопе темнопольным (параболоид- или кардиоид-конденсор).
2. Для создания оптически гомогенной среды на верхнюю линзу темиополь-
ного конденсора нанести каплю дистиллированной воды или иммерсионного
масла. Поднять конденсор до соприкосновения капли воды или масла с
предметным стеклом. 3. Установить достаточно сильный и стабильный
источник света (например, осветитель ОИ-7) и провести точную юстировку
осветительной системы микроскопа.
Возможные ошибки при микроскопии в темном поле связаны с наличием
пузырьков воздуха между конденсором и предметным стеклом, неправильной
установкой конденсора и другими причинами.
Техника люминесцентной микроскопии. В повседневной работе объект обычно
освещают сверху через объектив в падающем свете При этом используют синие
световые фильтры ФС-1 (2 мм), ФС-2 (4 мм) и желтый фильтр Ж-18 для задиты
глаз.
При работе с микроскопом МЛ-2 необходимо: 1) включить вилку блока питания
микроскопа в электрическую сеть; 2) поворотом по часовой стрелке
установить рукоятку регулятора напряжения у красной точки; 3) тумблер иа
лицевой стороне блока питания установить в положение "ВКЛ" (включено) и
нажать кнопку зажигания лампы микроскопа; если лампа ие загорается,
повернуть рукоятку регулятора напряжения на несколько миллиметров по
часовой стрелке и вновь нажать кнопку (на кнопку нажимать не более 2-3
с); 4) после зажигания лампы установить рукоятку регулятора рабочего тока
на отметку 4 А; через 10 мин после включения лампы микроскопа можно
начинать исследование препаратов.
Люминесцентную микроскопию проводят в затемненной комнате.
Методы приготовления препаратов для тем-нопольной, фазово-контрастной и
люминесцентной микроскопии. Для темнопольной и фазово-контрастной
микроскопии готовят нативные препараты ("раздавленная" капля и др.);
микроскопируют с объективом 40 или специальным иммерсионным объективом с
ирис-диафрагмой, позволяющей регулировать численную апертуру от 1,25 до
0,85. Толщина предметных стекол не должна превышать 1-1,5 мм, покровных-
0,15-0^2 мм.
Для люминесцентной микроскопии готовят на предметных стеклах препараты-
мазки или нативные препараты, которые окрашивают специальными
флюоресцентными красителями: акридиновым желтым, акридиновым оранжевым,
ауромином, корифосфином. При работе с иммерсионным объективом используют
нефлюоресцирующее масло.
Приготовление препаратов для исследования в электронном микроскопе имеет
ряд особенностей. Препараты готовят на специальных пленках-подложках, так
как стекло непроницаемо для электронов. Исследуемый объект максимально
очищают от посторонних примесей и наносят на пленку-подложку,
предварительно помещенную на опорную металлическую сеточку.
.19
щ
МОРФОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ
В данном разделе рассматриваются морфологические особенности основных
представителей многообразного мира микроорганизмов: бактерий, вирусов и
грибов. Бактерии относятся к царству прокариотов. Согласно классификации
Берги (1974), в него входят фото- и ско-тобактерии (индифферентные к
свету). Последние подразделяются на три класса: 1) бактерии;
2) бактерии, являющиеся облигатными внутриклеточными паразитами (рик-
кетсии и хламидии);
3) бактерии, лишенные клеточной стенки (микоплазмы).
Классы подразделяются на порядки, семейства, Рис. 11. Формы бактерий.
роды и вида рад групп
" - шаровидные; б - палочковидные; а - извитые мИКРООр^НИЗМОВ (грибы,
простейшие) относится к царству эукариотов. Вирусы выделены в отдельное
царство Vira.
Тем* 2. МОРФОЛОГИЯ И СТРУКТУРА БАКТЕРИЙ
Бактерии-одноклеточные микроорганизмы. Они имеют разнообразную форму и
