Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
Острая форма инфекции культур характеризуется деструктивными изменениями зараженных клеток, завершающимися их гибелью. При латентной форме инфекции репродукция вируса в зараженных клетках не сопровождается их гибелью, клетки остаются жизнеспособными и внешне могут почти не отличаться от контрольных, незаряженных культур.
Первые, наиболее ранние ответные реакции зараженных клеток, очевидно, могут быть общими при обеих формах инфекции.
Вирусы, инфицируя восприимчивую клетку, вызывают дезинтеграцию процессов клеточного синтеза. Путем биохимических исследований зараженных клеток рядом исследователей было обнаружено усиление синтеза нуклеопротеидов и других белков клетки [Н. А. Уголева, Г. В. Еремеев, В. А. Лаврушенкова, 1961: Беслер, Коммонер (Basler, Commoner, 1956); Аккерман, Лох. Пейн (Ackermann, Loh, Payne, 1959); Бонар, Парсон и др. (Вопаг Parsons et al., 1959); Гинсберг, Диксон (Ginsberg, Dixon, 1959): Каплан, Тамар Бен-Порат (Kaplan, Tamar Ben-Porat, 1960); Пот-стейн, Мансон (Pothstein, Man son, 1959)], повышение активности некоторых клеточных ферментов, в частности кислой фосфотазк [Ковач (Kovacs, 1956); Матзельт, Хэман, Леннартз (Matzelt, Но-mann, Lennartz, 1958); Ковач, 1958; В. Г. Заславский, А. М. Ам ченкова, 1960; В. Г. Заславский, 1959], и усиление гликолизе [Леви, Барон (Levy, Baron, 1956); Н. В. Чебуркина, Г. В. Еремеев и др., 1961; Фишер, Гинсберг (Fisher, Ginsberg, 1957)].
К числу ранних проявлений вирусной инфекции клетки может быть отнесено, очевидно, и увеличение размера их ядер.
Первым описал это явление Барнет (Burnet) в 1956 г. Увели чение размера ядра, по его представлению, являлось результате!* необычной физиологической активности клетки вследствие про никновения в нее нуклеиновой кислоты вируса.
Этот феномен был подвергнут систематическому изучение Я. Е. Хесиным с сотрудниками (Я. Е. Хесин, О. Ф. Сарычева
Ю. Н. Мастюкова, 1959а, 19596; Я. Е. Хесин, Н. Е. Гулевич, I960; Я. Е. Хесин, К. С. Блинников, 1960; Я. Е. Хесин, 1961). Феномен увеличения размера ядер, названный авторами дезинтегративным набуханием, изучался ими в однослойных культурах клеток, зараженных вирусами В, полиомиелита, осповакцины.
В этих исследованиях были использованы первичные культуры клеток почек обезьян макаки-резус и стабильные перевиваемые штаммы клеток СОЦ, Hep-1, Hep-2, HeLa и лейкемии.
В различных культурах зараженных клеток площадь ядер по отношению к площади ядер контрольных, незараженных культур клеток была увеличена: под воздействием вируса полиомиелита на 23—51%, вируса осповакцины — на 13—17% и вируса В — на 20—29%.
Площадь я(}ер. Сдр2
Рис. 21. Площадь ядер клеток лейкемии через раз»
ные сроки после заражения вирусом полиомиелита.
Вариационные кривые {Р. Е. Хесин, Н. Е. Гулевич,
I960).
/“-контроль, //— через 1 час, III—через 3 часа* IV- через 6 часов.
По мнению Я. Е. Хесина, в основе дезинтегративного набухания ядер клеток лежит усиление некоторых сторон клеточного метаболизма, наблюдающееся в течение латентного периода взаимодействия вируса и клетки. Эта реакция не зависит от дозы вируса; она не связана с величиной вирусных частиц, не является результатом избирательного поражения ядра или цитоплазмы и не зависит от типа клеточной культуры. Все это -свидетельствует о том, что дезинтегративное набухание ядер является неспецифической реакцией клеток на присутствие вируса в среде и характеризует наиболее ранний период патогенного действия вируса.
При латентной форме вирусной инфекции клеток средние размеры ядер в пораженной культуре остаются увеличенными в течение всего периода выделения вируса.
Интересно отметить, что, по наблюдениям автора, при выработке клетками невосприимчивости к данному вирусу средние размеры ядер не отличаются от размера ядер клеток контрольных, восприимчивых культур.
Размеры ядер клеток определяли по следующей методике. Пр< параты окрашивали гематоксилином и эозином. Контуры яде клеток с помощью рисовального аппарата зарисовывали при ув* личении в 2130 или 2500 раз; в каждом препарате зарисовывал не менее 100 ядер, а затем площадь ядер измеряли с помощы планиметра. Поскольку высота ядер в распластанных на стекл или на слюде однослойных культур клеток практически одинаков! величины их площади принимали соответствующими объему. Пс лученные в планиметрических единицах данные пересчитывали н
квадратные микронь Одна планиметрич( ская единица pai на 0,61 ц2. Логари<| мы полученных вел! чин разбивали н классы с интервЕ лом 0,05 lg V м2. Окот чательные данные oi кладывали на графя ках в виде вариацио* ных кривых и обрабг ты вали с помощы обычных приемов ва риационной стать стики.
На рис. 21 вариг ционными кривым представлены измен( ния в динамике разме ра ядер клеток лейке мии, зараженных вь русом полиомиелита. Ядра клеток Hep-i зараженных вирусом осповакцины, заметно отличаются по ра; мерам от ядер контрольных, незараженных клеток (рис. 22).
