Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Анджапаридзе О.Г. -> "Культура ткани в вирусологических исследованиях" -> 47

Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.

Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях — Москва, 1962. — 207 c.
Скачать (прямая ссылка): kulturarkani1962.djvu
Предыдущая << 1 .. 41 42 43 44 45 46 < 47 > 48 49 50 51 52 53 .. 101 >> Следующая

Лучшие результаты были получены при использовании концентрации клеток 105—3 • 10е; лаг-фаза при этом заканчивалась к 24 часам и в последующие сутки культура переходила в фазу логарифмического роста.
При выборе оптимальной концентрации клеток для дальнейших опытов авторы остановились на величине 2- 10s—2,5- 10s, которая при благоприятной динамике роста дает возможность получения больших количеств клеток.
Учитывая низкую интенсивность деления клеток во взвеси, были предприняты попытки повысить питательность среды добавлением больших количеств сыворотки животных.
Увеличение концентрации сыворотки в среде до 20% повышало интенсивность деления клеток в фазе логарифмического роста. При использовании более 'низких концентраций сыворотки (2—
10%) заметной разницы в интенсивности деления клеток обнаружено не было.
При анализе динамики роста клеток обращает на себя .внимание кратковременность фазы логарифмического роста; к 72 часам количество клеток в перемешиваемой взвеси резко снижается, в то время как в стационарных культурах кривая роста продолжает повышаться. Это может быть обусловлено накоплением в жидкой фазе токсических продуктов обмена й истощением питательной среды. Для восстановления состава и объема питательной среды, снижающегося в результате ежедневного отбора проб, е перемешиваемую взвесь добавляли свежую среду того же состава.
Добавление свежей среды активировало размножение клеток, но стимулирующее действие снижалось по мере старения культуры и к 10—11-му дню роста количество клеток достигало 10—20% исходной величины и на этом уровне держалось еще 2 недели, но жизнеспособность оставшихся клеток постепенно угасала.
При стационарном выращивании клеток из проб, отобранных в первую неделю культивирования глубинным методом, отмечено что эти клетки отличаются от исходных, полученных при трипсинизации почечной ткани, более высокой потенцией роста и боле€ интенсивным обменом. При высеве этих клеток в пробирки иле матрасы они в первые же часы прикреплялись к поверхность стекла и давали интенсивную пролиферацию. Сплошной слок ткани в пробирках формировался на 2—3-й день, в то время ка* исходные клетки давали такой слой на 5—6-й день. Для получения однослойной культуры при высеве клеток из перемешиваемо? взвеси их требовалось в 2—2Vs раза меньше по сравнению с количеством клеток из исходной взвеси.
Клетки из глубинных культур обладали более интенсивным обменом, о чем свидетельствует изменение pH среды. Так, уж« через 24—48 часов в пробирках, где выращивались клетки и; глубинных культур, наблюдался резкий сдвиг pH влево — дс 6,6—6,8. Такие изменения при культивировании трипсинизирован-ной взвеси наступали только на 4—5-й день.
Эти свойства сближают клетки, полученные при глубинное выращивании, с клетками первой генерации, снятыми со стекле при стационарном выращивании.
При просмотре окрашенных препаратов из клеток обоих типов отмечается четкое морфологическое отличие. Уже на 1—2-( ¦сутки наблюдается интенсивный рост клеток из глубинных куль тур. Митотическая активность их выше, чем у контрольных куль тур.
В культурах, полученных на б—7-е сутки глубинного роста в первые сутки после их высева в стационарные культуры появ лялись клетки с признаками дегенерации, состоящие из эозинофильной протоплазмы с темными мелкими ядрами.
В противоположность имеющимся в литературе указанияь на возможность неограниченного во времени культивированш
клеток во взвешенном -состоянии в исследованиях Е. М. Доссер и В. М. Дорофеева отмечался лишь кратковременный период активного размножения с последующим снижением клеточной популяции во взвеси и переживанием клеток в течение 3 недель. Полученные результаты могут быть объяснены тем, что перевиваемые линии клеток, использованные для глубинного выращивания другими исследователями, отличаются по физиологическому состоянию от клеток, полученных непосредственно из тканей организма животного. Они обладают большей потенцией роста, другим обменом, более устойчивы к механическим воздействиям и, главное, способны к неограниченному росту вне организма. Способность клеток почечной ткани обезьян к делению вне организма ограничена несколькими генерациями. Поэтому естественно, что и во взвешенном состоянии эти клетки обладают ограниченными сроками жизнедеятельности.
Изложенное выше, по общему мнению, свидетельствует, что глубинным методом удается с успехом культивировать пока лишь клетки стабильных перевиваемых штаммов. Первичные же клетки, полученные трипсинизацией из тканей животных, не способны к такому активному росту.
Рост клеток млекопитающих в глубинных культурах в свободно суспендированном состоянии открывает новые возможности. Этот метод позволяет получать более однородную клеточную популяцию, а также большие количества клеток для комплексных биохимических, цитологических и вирусологических исследований без применения таких диспергирующих агентов, как версен или трипсин. Наконец, применение глубинного метода выращивания позволяет иметь постоянный источник клеточных взвесей для повседневных лабораторных исследований.
Предыдущая << 1 .. 41 42 43 44 45 46 < 47 > 48 49 50 51 52 53 .. 101 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed