Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
По наблюдениям С. Я- Залкинда и JI. Г. Степановой (1960), н ранних стадиях инфекции отмечается повышение митотической at тивности зараженных клеток.
Так, заражение вирусом полиомиелита культур клеток COL HeLa и Нер-2, отличающихся большой митотической активностьк приводило на 2-й день к резкому увеличению их митотической аъ тивности (табл. 11).
Авторы предполагают, что это повышение митотической актшЕ ности носит реактивный характер и связано либо с защитно стимуляцией обмена веществ .клетки при воздействии вируса, либ с прямым повреждающим действием последнего, что приводит местным некротическим процессам, которые могут быть источнь ком стимуляции митотической активности.
Рис. 22. Однослойные культуры клеток Нер-2 на 4 сутки культивирования.
А—контрольная культура, С—культура через 4 часа после заражения вирусом вакцины (10 тыс. инфекционных единиц). Окраска железным гематоксилином по Гейдешайиу* X 490 {Я- Хесин и др., 1959)*
Стимуляция митотической активности в культивируемых вне организма клетках под влиянием вируса полиомиелита
Возраст Число мнтозов на 1000 неделя-
культуры, щнхея клеток
соц HeLa Hep-S
1 27 41 22
2 85 78 87
3 42 31 21
К числу ранних ответных реакций зараженных культур относятся также и реакции, выражающиеся в гибели части клеток, вызванной токсическим действием вирусов. Так, было отмечено развитие дегенеративных изменений в культуре эмбриональной ткани человека через .18 часов после введения 106—107 тканевых цитопатогенных доз (ТЦДбо вируса гриппа типа D (В. Н. Тарасов,
1958). Поскольку развитие этих изменений сопровождалось быстрым падением инфекционного титра вируса при отсутствии нарастания титра гемагглютининов в культуральной жидкости, они были отнесены за счет токсического действия вируса.
Токсическое действие вируса осповакцины наблюдали в смешанных эпителиально-фибробласгных культурах почек новорожденного кролика [Виешанж, Брион, Греет (Vienchange, Brlon, Gruest, 1957)] и в однослойных культурах клеток легочной ткани мышей-сосунков [Броун (Brown, 1957)].
Описано токсическое поражение человеческих и мышиных лейкоцитов, вызванное вирусом осповакцины [Нишми, Бернкопф (Nishmi, Bernkopf, 1958)]. Такое же действие оказывало введение вируса в культуры клеток макрофагального типа, полученных из выпота в брюшную полость белых мышей при асептическом перитоните.
Специальные исследования были посвящены изучению токсического действия вируса полиомиелита.
Пейн, Куртц и Аккерманн (Payne, Kurtz, Ackermann, 1958), Аккерманн (1958) при заражении клеток HeLa вирусом полиомиелита (штамм Махоней, I тип) установили, что в течение первого часа поражается 20% клеток культуры. Затем до 5-го часа число погибших клеток не увеличивается и лишь спустя этот период начинается обычная дегенерация зараженных клеток.
Результаты исследований, полученные этими авторами, графически представлены на рис. 23.
Исследователи считают, что разрушение клеток в течение первого часа инфекции вызывается веществом, отличным от собственно вируса. Это вещество обнаруживается в лизате инфицированных клеток и может оказывать быстрое цитотоксическое действие
при внесении его в свежие культуры клеток. Это вещество, назва1 ное авторами токсином, нейтрализуется сывороткой, получение путем иммунизации животных инфицированной жидкостью с кул: турой клеток. Антиклеточные сыворотки HeLa не обладали cm собностыю нейтрализовать токсин.
Не все штаммы вируса полиомиелита оказались способным проявлять токсическое действие на культуры клеток. Так, одн линия штамма вируса полиомиелита I типа, образующая больии-бляшки, вызывала образование заметных количеств токсическог вещества в лизате культур, в то время как другая линия вирус,
образующая мелкие бляшк не обладала токсическими дг культуры клеток свойствам Своеобразный тип токсич' ского действия на клетки бы выявлен у аденовирусов. Bb> дение вируса в культуры кл< ток HeLa или КВ в теченг нескольких часов приводило слущиванию части клсточнь: элементов с поверхности сте! ла [Рове, Хартли и др. (Row' Hartley et al., 1958); Бойе] Лейхтенбергер, Гинсберг (Boj er, Leuchtenberger, Ginsberj
1957)]. Было установлено, чт подобное действие оказывае не сама вирусная частица, токсический фактор, содержащийся в инфекционном материал (Рове, Хартли, Ройзман, Леви, 1958).
Рядом исследователей были предприняты специальные pa6oTi по изучению морфологических изменений клеток, инфицировав ных различными вирусами [Аккерманн, Рэбсон, Куртц (Ackei inarm, Rabson, Kurtz, 1954); Барский, Робине, Эндо (Barsk Robineaux, Endo, 1955); Биле, Стивенс, Девис, Штекив, Роде (Beale, Stevens, Davis, Stackiw, Rhodes, 1956); Бакли (Buckle} 1956); Дуннебак (Dunnebacke, 1956a, 19566); Эндерс, 1958; К- Xaj динг, Д. Хардинг, Мак Лимане, Рейк (С. Harding, D. Hardinf McLimans, Rake, 1956); Рессиг, Ховес, Мельник (Reissig, Howe: Melnick, 1955)].
