Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Анджапаридзе О.Г. -> "Культура ткани в вирусологических исследованиях" -> 49

Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.

Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях — Москва, 1962. — 207 c.
Скачать (прямая ссылка): kulturarkani1962.djvu
Предыдущая << 1 .. 43 44 45 46 47 48 < 49 > 50 51 52 53 54 55 .. 101 >> Следующая

Куяыпи/ираввт/е, час*
Рис, 20. Зависимость между концентрацией клеток во взвеси и их сохраняемостью (Ермакова, 1961).
/—число клеток 3-М*—5-10\ //- число клеток Ш* 3-1(Г‘, III 4-10*—10s.
кинд (1959). По их данным, взвеси клеток HeLa, хранившиеся в течение 10—15 суток, обнаруживают при последующем культивировании нормальное морфологическое строение и интенсивный рост. Наиболее интенсивный рост клеток наблюдается при их хранении в среде, содержащей 40% сыворотки человека. Более высокое содержание сыворотки неблагоприятно для выживания клеток во взвеси. Наиболее оптимальная концентрация клеток во взвеси для хранения —¦ 100 ООО в 1 мл. При большем числе клеток они быстрее подвергаются дегенерации, и длительное их хранение становится невозможным. Лучше всего сохраняются клетки, снятые с матрасов на 5—7-й день культивирования. Клетки, взятые в более поздние сроки, оказываются при хранении менее жизнеспособными. При хранении взвеси при 4° клетки длительное время остаются жизнеспособными только в средах, содержащих сыворотку человека. В этом случае они способны к росту даже на 30-е сутки консервирования. Взвеси в средах с коровьей сывороткой (10%) хранить при 4° более 6 суток нецелесообразно.
Однако при хранении клеток при 4° отмечается их дегенерация, особенно через 10 суток; их способность к росту при последующем культивировании оказывается значительно сниженной.
Наиболее благоприятной для хранения клеток HeLa является температура 20—22°. В этом случае клетки сохраняются без большого ущерба в течение 15 суток в среде, содержащей коровью сыворотку, и до 25 суток в среде, состоящей из 0,5% гидролизата лактальбумина в солевом растворе Хэнкса и 5% сыворотки человека.
По наблюдениям Л. Г. Степановой, однослойные культуры клеток стабильных перевиваемых штаммов (HeLa, СОЦ, Нер-2) при комнатной температуре со сменой среды на 10—12-й день могут сохраняться до 2 месяцев и более. Передерживание однослойных культур клеток в течение нескольких дней при комнатной температуре является довольно распространенным приемом, используемым в лабораторной практике.
Специальные исследования были посвящены изучению условий консервирования различных культур клеток при низких температурах.
Шерер и Хугасьян (Scherer, Hoogasian, 1954) успешно сохраняли в течение 6—7 месяцев при температуре —€0—70° штаммы клеток L и HeLa.
Лучшие результаты были получены в том случае, когда взвесь клеток штамма готовили 'в питательной среде М с лошадиной сывороткой и 5% глицерина, а взвесь клеток штамма HeLa в питательной среде MS, но с сывороткой человека и с 20 или 30% глицерина.
На выживаемость клеток штамма L влияла скорость замораживания, Так, медленное замораживание в течение 1—IV2 часов дало лучшие результаты, чем быстрое замораживание,— в течение 3—5 минут.
Оба типа клеток (L и HeLa) лучше сохранялись при температуре —60—70°, чем при температуре —20°.
Важным моментом, влияющим на жизнеспособность клеток, оказалась скорость -оттаивания замороженных взвесей. Быстрое оттаивание .взвесей клеток в течение 1—2 минут дало наилучшие результаты.
Суим, Хафф и Паркер (1958) исследовали выживаемость при температуре —70° ряда штаммов клеток, выделенных из тканей различного вида животных и пассированных in vitro, к моменту их исследования от нескольких недель до 3—5 лет.
Изучаемые штаммы хранили при температуре —70° не менее
3 лет. Выживаемость хранящихся клеток зависела от метода замораживания и оттаивания взвеси клеток и от концентрации (5— 20%) глицерина в питательной среде, в которой были суспендированы клетки. Эти условия оказались различными для разных штаммов .клеток. Даже при оптимальных условиях опыта у одних штаммов в течение 3 лет выживало 50% клеток, тогда как у других 50% клеток выживало .в течение 1—lVs лет.
Сталберг и др. (Stulberg et al., 1958, 1959) проводили исследования по сохранению при температуре —70° 17 эпителиальных (Ep-L) и 2 фибробластовых (Fb-L) штаммов клеток человека (Detroit) путем медленного замораживания в питательной среде, содержащей 5% глицерина. После быстрого оттаивания у всех клеток, хранившихся при температуре —70° очень скоро восста-иавливалась способность к быстрой пролиферации без изменений в степени или характере роста.
Затем исследовали два типа клеточных суспензий: 1) свеже-трипсинизированные почечные клетки обезьяны мака на-резус, и
2) вторую генерацию клеток обезьяньей ночки, которые выращи* вали в среде Игла, содержащей 5% телячьей сыворотки. В обоих случаях перед замораживанием клетки ресуспендировали в специальной среде, состоящей из 80% основной среды Игла, 15% телячьей сыворотки и 5% глицерина.
Перед ресуспендированием подсчитывали количество клеток я из них готовили суспензии, содержащие в 1 мл от 800 000 до
2 млн. клеток. Взвеси клеток разливали по 4 мл во флаконы на
5 мл.
Для замораживания использовали взвесь клеток в такой концентрации, чтобы при использовании ее для приготовления культуры ткани требовалось развести питательной средой не менее чем 1 : 10. Благодаря такому разведению устранялось нежелательное действие глицерина, присутствующего в среде замораживания.
Предыдущая << 1 .. 43 44 45 46 47 48 < 49 > 50 51 52 53 54 55 .. 101 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed