Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
При помощи флуоресцирующих антител вирусный белок был обнаружен в цитоплазме через 2 часа после инфицирования клеток. Через 3 часа антиген определялся в ядре клетки, а через 4 часа большое количество антигена вновь обнаруживалось в
цитоплазме. Последнее автор считает соответствующим моменту появления нового вируса.
С. Я- Гайдамович, А. И. Львова, С. М. Клименко (1961), И. А. Львова (1961) исследовали внутриклеточную локализацию антигена вирусов весенне-летнего клещевого и японского энцефалитов. Антиген этих вирусов в процессе синтеза локализуется лишь в цитоплазме зараженных клеток.
По наблюдениям В. Д. Лотте, Ф. М. Кирилловой (1961), в клетках культуры ткани почки обезьяны, зараженных вирусом гриппа и парагриппозного вируса (Сендай), антиген через 30 минут после заражения обнаруживался и в ядре, и в цитоплазме. Через 2 часа антиген наблюдался лишь в цитоплазме, а через 6—12 часов — в цитоплазме, особенно в околоядерной области. Через 18 часов антиген обнаруживался, кроме того, в клеточной и ядерной оболочках и в некоторых ядрах. Ядрышки не содержали антигена. Наибольшее количество антигена в этих же частях клетки наблюдалось через 24 часа.
Б. М. Жданов с сотрудниками (В. М. Жданов, 1961; В. М. Жданов, А. Г. Букринская, 19616, в; А. Г. Букринская, В. М. Жданов, Г. П. Раменская, 1961) методом авторадиографии в опытах с вирусом Сендай, меченным радиоактивным фосфором, серой и углеродом, показали, что во внутрь клетки проникает лишь вирусная нуклеиновая кислота, тогда как все белковые компоненты вирус-ной частицы остаются вне клетки. Радиоактивная нуклеиновая кислота или ее компоненты через 10 минут после контакта вируса с клеткой достигают ядра и локализуются в ядрышке, через 30—60 минут покидают ядрышко и кумулируются в ядре. Спустя
3—4 часа -нуклеиновые компоненты вируса обнаруживаются как в ядре, так-и в цитоплазме.
Особенный интерес представляет время синтеза вирусной нуклеиновой кислоты и время образования зрелого вируса в инфицированных клетках.
Исследуя синтез вируса ящура, Броун и Стюарт (Brown, Stewart, 1959) установили, что инфекционная РНК обнаруживается в клетках во время лаг-фазы на несколько часов до появления зрелого вируса.
Аналогичные результаты были получены Зальцманом (Salz-шап, 1960) при изучении синтеза вируса осповакцины в культуре клеток HeLa. Синтез вирусной ДНК завершался за 6V2 часов и на 3—3V2 часа опережал образование зрелого вируса.
С этими данными не согласуются результаты исследований времени синтеза РНК и зрелого вируса полиомиелита в инфицированных клетках HeLa [Дарнелл, Левитов и др. (Darnell, Levin-tow et al., 1961)]. Синтез вирусной РНК и вирусного белка начинался через 3 часа после заражения клеток и лишь на 30 минут опережал появление зрелого вируса полиомиелита. Наблюдались прямая зависимость и параллелизм в синтезе полиомиелитной РНК и белка.
Для синтеза вирусных нуклеиновых кислот .и белка в инфицированной клетке не требуется каких-либо новых энзимов. К этому выводу, в частности, пришли Веккер и Копровский (Wekker, Кор-rowski, 1961), исследуя синтез вирусов восточного и западного лошадиного энцефаломиелитов.
На основании этого можно предположить, что химиотерапия вирусных инфекций путем воздействия антиметаболитами на клеточный обмен будет бесперспективной, так как ингибиторы действуют лишь на нормальные энзимы клеток,
Морган (Morgan, 1960), основываясь на анализе собственных материалов и материалов других исследователей, считает, что в ядре зараженной клетки происходит репродукция вирусной нуклеиновой кислоты, а в цитоплазме — вирусного белка.
Автор следующим образом излагает схему процесса взаимодействия вируса с клеткой, его репродукцию в клетке и выход из нее (рис. 30).
Вирус состоит из центрально расположенной нуклеиновой кислоты. Последняя окружена белковой и липоидно-полисахаридной оболочками.
Присоединение вируса к поверхности клетки происходит за счет электростатических сил и адсорбции на рецепторах клетки. При проникновении в липоиднополисахаридной оболочки.
В цитоплазме белковая оболочка распадается и высвобождается нуклеиновая кислота. С этого момента наступает эклиптическая фаза. В этот период вирус в инфекционном виде не обнаруживается. В цитоплазме начинается репродукция вирусного белка.
Вирусная нуклеиновая кислота проникает в ядро клетки и здесь происходит репродукция вирусной нуклеиновой кислоты, которая по мере накопления выходит в цитоплазму, где соединяется с вирусным белком, и таким путем формируется зрелый вирус. На этом ваканчивается эклиптическая фаза.
При выходе из клетки зрелый вирус заключается во вторую липоиднополисахаридную оболочку, являющуюся продуктом клеточной оболочки. Морган высказывает предположение, что именно с этой оболочкой, возможно, и связана избирательная чувствительность клеток к определенным вирусам.
Пока имеется мало сведений о месте комплектования в клетке полного вируса и механизма выделения вируса из клетки. Очевидно, у разных групп вирусов эти процессы проходят по-разному.
