Синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови - Макацария А.Д.
ISBN 5-8249-0078-7
Скачать (прямая ссылка):
Тест выполняется в трех пробирках, в которые помещены: 1) 100 мл плазмы (PPP) пациента, 2) 100 мл позитивного контроля, 3) 100 мл негативного контроля. Во все три тест-пробирки добавляется 50 мл суспензии человеческих эритроцитов, покрытых мономерами фибрина, перемешивается и инкубируется при 37°С - 10 минут. Затем содержимое каждой из пробирок помещают на пластину в течение 6 минут, с помощью механической качалки (или вручную) перемешивают и наблюдают агглютинацию эритроцитов.
Интерпретация результатов может быть записана как +++ - при массивных агтлютинатах, ++ - при множественных крупных и мелких агглютинатах.
Тест имеет аналогичные этаноловому и протамин-сульфатному тестам ограничения: образцы со сгустками и нитями фибрина дают «ложно-позитивные» результаты и не пригодны для исследования. Тест отличается высокой чувствительностью, специфичностью и воспроизводимостью.
6.2.2. Определение продуктов деградации
фибрина и фибриногена (ПДФ)
Более специфическими тестами, чем паракоагуляционные тесты (определения растворимых комплексов мономеров фибрина РКМФ, этаноловый, протамин сульфатный), являются тесты определения продуктов деградации фибрина и фибриногена (ПДФ), основанные на иммунологических реакциях. К ним относятся тесты непрямой реакции торможения гемагглютинации (НРТГ) и латекс-тесты с использованием частиц латекса, сенсибилизированных фрагментами Д-Е Д-Димер ПДФ, а также тест склеивания стафилококков (для выявления высоко-
346
молекулярных фрагментов X-Y; мономеров фибрина и фибриногена). Тест ингибиции гемагглютинации noMerskey С,1966 Иммунологический метод определения фибрин/фибриногеновых деградационных продуктов (ФДП) в сыворотке крови основан на проведении реакции ингибиции гемагглютинации с использование эритроцитов сенсибилизированных фибриногеном и антифибрииовой сыворотки.
Для исследования брали кровь из локтевой вены в количестве 2,0 мл в пробирку, содержащую тромбин 20 ЕД и трасиол 3600 ЕД. После образования сгустка, содержимое пробирки инкубировали при 37°С в течение 30 минут и центрифугировали при 1500 об/мин - 10 минут. Затем сыворотку переносили в другие пробирки, в которых сыворотка сохранялась до проведения теста. Если нет необходимости проводить определение ФДП вскоре после получения сыворотки, то она может сохраняться при -2O0C
Концентрация ПДФ определяется путем умножения концентрации стандартного фибриногена, соответствующей «конечной точке» контрольного ряда, на титр разведения, соответствующий «конечным точкам» при использовании стандартных пластин для микротитрования.
Тест склеивания стафилококков (ТСС) по методу Hawiger и соавт., 1970
Тест склеивания стафилококков (ТСС) для определения ранних фибрин/фибриногеновых деградационных продуктов (ФДП) по методу Hawiger и соавт., 1970, основан на использовании штаммов стафилококков, способных агглютинировать в присутствии минимальных концентраций продуктов расщепления фибрина/фибриногена. Устранение фибриногена, растворимых комплексов фибрин-мономера и фибрин-полимера достигается коагуляцией их после добавления тромбина, а вторичный фибринолиз блокируется добавлением ингибиторов протеаз (апротинин, контрикал и др.)
Определение концентрации ФДП в сыворотке крови осуществляется путем сравнения чувствительности суспензии стафилококковых клеток соответствующей минимальной концентрации фибриногена с титром разведения исследуемой сыворотки и выражается в эквивалентах стандартного раствора фибриногена
Из доступных в настоящее время методов (угнетение гемагглютинации, агглютинации латекса, иммунодиффузии) тест склеивания стафилококков представляется наиболее чувствительным, он позволяет определять продукты расщепления фибрин/фибриногена в концентрации 0,05 мкг/мл.
Содержание ФДП в исследуемых сыворотках рассчитывается в эквивалентах образуемого фибриногена, умножая титр максимального разведения сыворотки, в котором наблюдалось явление склеивания стафилококковых клеток. Для предупреждения искажения
347
результатов теста, проводится определение контроля буферного раствора, используемого для приготовления разведений фибриногена и сывороток, путем смешивания его с суспензией стафилококковых клеток, при этом не должно наблюдаться явления склеивания стафилококков. Для исключения влияния антител к стафилококкам образцы сыворотки прогревали при 56°С для разрушения ПДФ. Склеивание стафилококков после этого относили к влиянию термостабильных антител.
Определение Д-Димера в последнее время стало использоваться наиболее широко из-за относительной простоты метода и высокой чувствительности, особенно при иммуноферментной технике определения (латекс-тест выполняется в полуколичественном варианте).
Ввиду неспецифичности ПДФ-определения Д-Димер также требует клинической интерпретации (может быть повышен при ДВС, тромбозах, лечебном тромболизисе, серповидно-клеточной анемии и др.). Отсутствие Д-Димера при клиническом подозрении на тромбоэмболию легочной артерии позволяет опровергнуть этот диагноз с
¦ #
