Подготовка биологического материала для молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел - Корниенко И.В.
ISBN 5-7509-0904-2
Скачать (прямая ссылка):
ПРИМЕР 6.
Вычислить относительное содержание молекул яДНК и мтДНК в крови человека.
Исходя из допущений, принятых в Примерах 4 и 5, имеем:
Nmtahk/N^hk = (пмтднкхСт)/Сл = [(20x300000) +
+ (100х8000)]/8000 = 850.
Следовательно, в крови содержится, как минимум, в 850 раз больше молекул мтДНК по сранению с яДНК. Данное обстоятельство следует учитывать при выборе того или иного генетического маркера, т.е. тех или иных полиморфных участков ядерной или митохондриальной ДНК при анализе микроследов крови.
/
\
Г
/
Ч
\
/
ч
/
. : .
¦л
*»•
vrt
*4
V'
г*
V"
»¦
Л
• у
м
ЛИ*
Ъ
f
ЭЕ
/•; :
—,*тм>тт ..........
..я.
d
N
л * '
С>
*¦
ш
$
&
о
<4
*1
iiiА: г:-'1.:
'к
\
¦1
<
> . <
\."-л hi * л‘ Vi-i' ; iis if*i :• : '1
*
3818372A
3818372B
3818372С
3818372D
L 3818372E ^
Рисунок 3. Лицевая сторона FTA (Fitzco) карты. Карточка легко разделяется на две половинки. С левой стороны расположены четыре окружности (по две на каждой половинке), обработанные специаль-
ным буфером с консервантами. Справа расположены маркировочные штрихкоды. В центре имеются по две зоны (по одной на каждой половинке) для отпечатка правого указательного пальца, для маркировки штрихкодом и для подписи донора.
1. Сбор и хранение крови на FTA Gene Guard
системе
FTA Gene Guard классическая карта, содержащая специальным образом обработанную бумагу (размером 3x3 дюйма), предназначена для сбора, хранения и транспортировки биологического материала (рис. 3 и 4).
Рисунок 4. Обратная сторона FT A (Fitzco) карты. Здесь заносятся данные о доноре: фамилия, имя, отчество, дата взятия крови, дата рождения.
Карточки FTA с «системой защиты гена» — безопасная и удобная система для сбора, транспортировки и хранения образцов крови и других биологических жидкостей. FTA-карточки состоят из фильтровальной бумаги, обработанной буфером, содержащим мощные денатурирующие вещества, предотвращающие рост бактерий и других микроорганизмов, а также защищающие ДНК от действия нуклеаз, окисления и УФ повреждений. После специальной обработки FTA-карты с нанесенным биологическим материалом происходит разрушение клеточных мембран и высвобождение ДНК из органелл и ее прочное связывание с FTA-матриксом (рис. 5 и 6).
Рисунок 5. Электронная микрофотография белых клеток крови, сорбированных на волокнах FTA-бумаги (увеличение — 10 ООО раз); по J.Skepper, Multi Imaging Centre, Cambridge University, Cambridge, UK.
Рисунок 6. Электронная микрофотография нитей ДНК, захваченных волокнами FTA-бумаги (увеличение — 10 ООО раз); по J.Skepper, Multi Imaging Centre, Cambridge University, Cambridge, UK.
Матрикс, обработанный FTA, может быть использован для сбора образцов периферической крови, полученных как при простом проколе пальца иглой-скарификатором, так и при заботе крови в пробирку с использованием антикоагулянтов (например, цитрата натрия, ЭДТА). На FTA-карточке имеются четыре типографски исполненных окружности, которые имеют лить ориентировочное значение (рис. 3). Предварительной обработке подвергается вся поверх-
• ч. .
ность карточки. Таким образом, при необхо* димости вполне допустимо образовать пятно крови и за пределами этих окружностей. Диаметр каждой из окружностей рассчитан таким образом, чтобы вместить приблизительно 100 мкл цельной крови. Таким образом, вместимость каж-
г
дой карточки составляет 400 мкл. Разумеется, вместимость карточки увеличивается, если кровь наносится и за пределы очерченных окружностей.
Во избежание избыточной нагрузки на защитные вещества карточки рекомендуется наносить пятно крови только на ее верхнюю поверхность и прекращать нанесение крови на какой-либо из участков карточки, как только на противоположной стороне этого участка ясно проявится пятно крови. Это простое правило нанесения крови имеет два следствия. Во-первых, защитные реагенты карточки остаются в достаточном избытке. Во-вторых, загружается примерно постоянное количество ДНК, что позволяет добиться воспроизводимости условий проведения полимеразной цепной реакции.
