Подготовка биологического материала для молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел - Корниенко И.В.
ISBN 5-7509-0904-2
Скачать (прямая ссылка):
Кость — наиболее твердая ткань организма, что обуславливает особенности взятия материала для молекулярно-генетического анализа. Основным инструментом для взятия костного материала при вскрытии является пила из стан-
дартного секционного набора, либо пила по металлу (при заборе мелких фрагментов пила по металлу является предпочтительной). Перед забором материала полотно пилы должно быть тщательно обработано активными хлорсодержащими соединениями с целью предотвращения контаминации молекулами «чужой» ДНК.
Костные ткани являются особой формой соединительной ткани, состоящей из клеток и костного вещества, содержащего около 70% неорганических соединений (рис. 8). Основное вещество содержит много лимонной и других кислот, образующих комплексы с кальцием, им-прегнирующим органическую матрицу кости. Здесь также содержатся кристаллы гидроксиа-патита, а также аморфный фосфат кальция.
Костные ткани содержат три вида клеток, основными из которых являются ядросодержащие остеоциты (в 1 мм3 костной ткани содержится примерно 20 — 26 тыс. остеоцитов), в цитоплазме каждого из которых имеется несколько митохондрий.
Первый этап обработки костных фрагментов — это их очистка от остатков костного мозга, мышечных тканей и сухожилий и обработка активными хлорсодержащими соединениями. Затем следует дробление и помол костных осколков. Эта стадия является очень важной, т.к. эффективность экстракции ДНК обратно пропорциональна размеру частиц костной пыли.
Рисунок 8. Схема строения трубчатой кости
(по Елисееву В.Г., 1970).
А — надкостница; 1 — волокнистый слой; слой малодифференцированных клеток; а — кровеносный сосуд. 2 — компактное вещество кости; 3 — слой наружных общих пластинок; 4 — остеон; б — канал остеона; в — прободающий канал; 5 — система вставочных пластинок; 6 — слой внутренних об-
щих пластинок. В — костномозговая полость; 7 — костная трабекула губчатой ткани. Г — эндост.
Если по каким-то причинам не удается получить достаточное количество ДНК из костного фрагмента, тогда целесообразно попробовать провести предварительную декальцинацию костной ткани (если мы не имеем дело с горелым образцом). В данном случае имеется в виду бескислотная декальцинация, так как в кислой среде происходит апуринизация ДНК и дальнейшая деградация нуклеиновых кислот.
В ряде случаев, когда поверхность костных фрагментов загрязнена чужой ДНК, помимо чисто механической обработки биоматериала предварительная процедура декальцинирования костной стружки помогает преодолеть трудности работы с контаминированным материалом. На рисунках 9 и 10 приведены результаты амплификации STR-локусов ДНК, после выделения из контаминированного костного образца, в одном случае без применения предварительной декальцинации костной стружки и после ее декальцинации с 0,5 М раствором ЭДТА.
В качестве декальцинирующего агента, как правило, используется динатриевая соль этилен-диаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), имеющая важное свойство: ее растворы в комбинации с ионами кальция формируют легко растворимые в воде отрицательно заряженные (и, следова-
abiA
PRISM-
Ger*Scan® 3 1
90
too
120
140
180
180
200
ut.
.jl
220
240
* - -
280
-
280
300
320
340
О.
360
4
IB 22 В: 22*734 cti • / 734 Cb ft
НИ a О . 22*734 cti i ' 734 eft >
п v 22*734 Ch » / 734 ch 1
2Z R: 22*734 Cfl t /
DyVSampU So* Peek Haight Peak ArM Point
РнК i
1 22В.1 44. »е 118.01 1 1 72 1671
2 2 8,2 45.44 121.95 277 2170 1704
22В. 3 46.35 j 126.04 _j 1 6 j 93 , 1738
228,4 ~' 47 25 , 130 16 54 ! 390 | 177?
228, в 49.12 138 75 _________19 , 137 1 B42
> 22В.6 58 16 176.75 53 501 2161
22В. 7 5» 15 180 70 1 3 122 2216
22В. 6 40 10 184 76 34 366 2256
226.1 41 89 106.24 254 1932 1571
22G, 2 43.17 111.86 177 1329 1819
226, 3 48.37 135.30 75 814 1814
220,4 1 51.17 148.42 | 82 517 1919
220, В 52.13 182.61 30 236 1985
220, в 54 08 180.32 55 491 2028
220,7 65 97 207.75 14 162 2474
220, 8 66.86 211.29 _17 240 2508
220. 0 60.57 221.75 16 283 2609
22 Т, 1 51.89 151.56 92 606 1946
22Y.2 52 85 155.47 60 465 1982
22Y. 3 65.76 206.91 12 150 2466
22Y, 4 68.01 219.17 Z6 326 2564
22R.1 * 40 45 100.00 192 ; 1433 1517
22R.2 • 49 17 139.00 194 15B6 1644
22R.3 * 51.52 150.00 193 1690 1932
22R.4 • 64.00 | 160.00 191 1792 2025
22R.8 • 64.00 200.00 146 2018 2400
