Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
калибровочный раствор железа, содержащий 30 мкмоль/л. Сначала готовят раствор соли Мора [железоаммонийные квасцы, аммоний-железа сульфат — FeSO4-(NH4)SO4-OH2O], содержащий 3 ммоль/л: растворяют 1,178 г в 5 мл 0,3 моль/л HCl и доводят объем до 1 л водой, содержащей в 1 л 1 мл концентрированной серной кислоты. Этот раствор разводят подкисленной водой в 100 раз; получается раствор, содержащий 30 мкмоль/л, или 1,67 мкг/мл железа.
Ход определения. К2 мл сыворотки крови (без следов гемолиза) прибавляют 2,5 мл воды, 1,5 мл 20%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и ставят на 15 мин в водяную баню температурой 90—95 °С. Затем центрифугируют 20 мин при 2000—3000 мин-1 и отбирают 4 мл прозрачного слоя, к которому приливают 0,35 мл 70%-ного раствора аммония ацетата и 0,3 мл раствора сульфата гидрозина. Смесь фотометрируют при длине волны 535 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см, затем прибавляют 0,4 мл раствора сульфонированного ?-фенантролина, оставляют на 1 ч и снова фотометрируют при той же длине волны. Обе фотометрии выполняют против холостой пробы, для которой вместо исследуемой сыворотки берут 2 мл воды. Калибровку проводят так же, как и основной опыт, но вместо сыворотки берут 2 мл калибровочного раствора.
Расчет сывороточного железа ведут по формуле
CC '
где X — количество сывороточного железа, мкмоль/л; Еоп[ и E0nI — отсчеты опытной пробы до и после прибавления раствора сульфонированного ?-фенантролина; Ек{, ЕК2 — соответственно результаты калибровочной пробы; 30 — содержание железа в калибровочном растворе, мкмоль/л.
Примечания. 1. Время между взятием крови и получением сыворотки не должно превышать 2 ч. При комнатной температуре при хранении в закрытой пробирке железо в сыворотке стабильно 7 дней, при 4—8 °С — 3 нед, при —20 °С — около 1 года. 2. Лабораторную посуду рекомендуется промывать 1%-ным раствором ЭДТА с последующим отмыванием бидистиллированной водой. 3. Если после удаления белков не удается набрать точно 4 мл надосадочной жидкости, можно взять меньшее ее количество и сделать поправку при расчете или же взять точно такое же количество калибровочного раствора.
Источник: 43.
217
Определение железа в сыворотке крови можно проводить с использованием набора реактивов фирмы «Ла-Хема» (Чехия).
Клиническое значение. Так как подавляющая часть железа находится внутри эритроцитов и входит в состав гемоглобина, определение его в цельной крови не имеет практического значения. Представление о его количестве можно сделать по определению гемоглобина. Большее клиническое значение имеет определение железа в плазме (сыворотке) крови, где содержание его в несколько раз ниже, чем в цельной крови.
Состояние обмена железа объективно характеризует количество негеминного сывороточного железа, т. е. трансферрина, феррити-на и гемосидерина, так как это основной резерв, который используется организмом в случае необходимости.
Трансферрин — растворимый в воде железопротеин, гликопро-теин с содержанием около 0,13 % железа. Он служит физиологическим переносчиком железа в организме.
Ферритин — железосодержащий белок (металлопротеин) с содержанием железа около 20 %. Он сосредоточен главным образом в селезенке, печени, костном мозге, выполняет роль депо железа в организме.
Гемосидерин — водонерастворимый железосодержащий белковый комплекс, в состав которого входят нуклеопротеиды и углеводы. Содержится главным образом в ретикулоэндотелиоцитах печени и селезенки.
Определение сывороточного железа проводят для выявления железодефицитного состояния. Унифицированным методом определения сывороточного железа является ?-фенантролиновый.
Содержание железа в сыворотке крови животных составляет 110—200 мкг/100 мл. Снижение уровня железа в сыворотке крови свидетельствует о развитии железодефицитной анемии, которая часто отмечается у поросят, телят, щенков, ягнят, жеребят, а также у животных других возрастных групп. Причинами ее могут быть недостаточное, скудное, несбалансированное кормление животных; нарушение всасывания железа из пищеварительного тракта при заболевании желудка и кишечника; хронические рецидивирующие кровопотери из желудочно-кишечного тракта (язвенная болезнь); усиленное потребление железа при беременности; замедление мобилизации и нарушение транспорта железа из депо; гипоси-деринемия при избыточном накоплении железа в клетках РЭС; потеря трансферина при нефротическом синдроме и др.
Определение меди и железа в крови по Сенделу в модификации С. Г. Кузнецова. Принцип. Медь с дифинилкарбазоном, а железо с о-фенантролином при определенном pH образуют соединения, придающие растворам определенную окраску, степень которой измеряется на ФЭКе.
Реактивы: 0,5 моль/л раствор хлористоводородной кислоты; 2 моль/л раствор хлористоводородной кислоты;
218
10%-ный раствор аммиака;
0,1%-ный водный раствор и-нитрофенола (NO2CgH4OH); 1%-ный раствор аскорбиновой кислоты;
1%-ный раствор солянокислого о-фенантролина. Два последних раствора хранят в холодильнике в темных склянках; 0,1%-ный раствор фенолфталеина;
