Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
212
доструйного насоса или шприца или отбирают сразу нижний слой пипеткой с грушей. При хорошем качестве реактивов цвет не должен изменяться в течение суток.
Содержание цинка в образце находят по калибровочной кривой. Для построения ее в делительные воронки или пробирки с притертыми пробками вносят 1, 2, 3, 4 и 5 мл рабочего калибровочного раствора цинка. Объем до 5 мл доводят 0,3 моль/л раствором соляной кислоты. Далее поступают так же, как и с образцами.
Расчет ведут по формуле
„= AV-100 ВС '
где Jc — количество цинка в пробах, мкг%; А — количество цинка по калибровочной кривой, мкг; V — объем раствора золы, мл; В — количество крови, мл; С — количество раствора золы, взятого для анализа, мл; 100 — коэффициент для пересчета в мкг%.
Примечание. Антикоагулянт — гепарин. Отделить сыворотку или плазму от эритроцитов не позднее чем через 45 мин. Избегать контакта крови с резиновыми пробками. Цельная кровь хранению не подлежит. Сыворотку или плазму можно хранить при комнатной температуре в течение 1 нед, при 4—8 °С — 2 нед, при -20 °С — до 1 года.
Источники: 52, 73.
Клиническое значение. Влияние цинка на организм проявляется через действие многочисленных ферментов (карбок-сипептидазы, карбоангидразы, щелочной фосфатазы, малатдегид-рогеназы, аргиназы, уриназы и др.), для которых он является необходимым компонентом или активатором. При недостатке цинка в организме задерживаются рост, развитие, костеобразование, у поросят появляется паракератоз, у самцов снижается спермопро-дукция. Нормативы цинка в цельной крови, мкг%: крупный рогатый скот 300—500, свиньи — 400—420; в сыворотке крови: крупный рогатый скот 100—150, овцы 100—200, свиньи 100—160.
Содержание цинка чаще определяют в сыворотке крови. Для этого используют химические, полярографические и другие методы. Цинк, марганец, кобальт, железо в кормах и других объектах определяют на атомно-абсорбционном спектрофотометре (C-115 M-1).
Флуориметрический метод определения селена с 2,3-диаминона-фталином. Принцип. Определение селена с 2,3-диаминонафта-лином (2,3-ДАН) основано на способности этого реактива избирательно образовывать комплексное соединение с четырехвалентным селеном, находящимся в форме селенит-иона (SeO32-).
Разложение образца проводится смесью азотной и хлорной кислот, перевод шестивалентного селена в четырехвалентный реакци-онноспособный селенит-ион достигается нагреванием раствора с концентрированной соляной кислотой.
213
Четырехвалентный селен в форме селенит-иона (SeOj ) взаимодействует с 2,3-ДАН с образованием комплексного соединения 4,5-бензопиазоселенола, флуоресцирующего под действием ультрафиолетовых лучей. Соединение экстрагируют из кислых растворов органическими растворителями — циклогексаном, н-гекса-ном, декалином, толуолом. Максимум светопоглощения 4,5-бензопиазоселенола в циклогексане находится при 378 нм, максимум флуоресценции — при 520 нм. Интенсивность флуоресценции определяют на флуориметре. Чувствительность метода 0,001 мкг/г.
Реактивы: азотная кислота концентрированная (х. ч.);
соляная кислота (х. ч.);
0,1 моль/л раствор соляной кислоты из стандарт-титра;
аммиак, водный раствор 1:10;
хлорная кислота (х. ч.), 57%-ный раствор;
комплексен III (динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, трилот Б), 2%-ный раствор;
аммония персульфат [(N?!4)28203, х. ч.];
селен металлический (х. ч.);
н-гексан или циклогексан, перегнанные;
0,1%-ный водный раствор 2,3-диаминонафталина. 0,1 г реактива заливают 100 мл 0,1 моль/л соляной кислоты, перемешивают до растворения навески и очищают экстракцией гексаном. Для этого солянокислый раствор 2,3-ДАН вносят в делительную воронку, добавляют 15 мл гексана и встряхивают 1 мин. После разделения фаз солянокислый раствор 2,3-ДАН переливают в другую делительную воронку, а органическую фазу выбрасывают. Добавляют к раствору 2,3-ДАН еще 10 мл гексана и очистку повторяют. Очищенный солянокислый раствор 2,3-ДАН фильтруют и используют для анализа. Хранят в склянке темного стекла не более 3—4 дней;
калибровочные растворы селена, содержащие 100, 10,0,1 мкг/мл. Раствор А. Навеску массой 0,1г металлического селена растворяют в 10 мл концентрированной азотной кислоты сначала на холоде при помешивании, затем при нагревании. Раствор упаривают на водяной бане до влажной массы. Полученную селенистую кислоту (НгЗеОз) растворяют в воде, раствор переносят в мерную колбу на 1 л, прибавляют 10 мл концентрированной соляной кислоты и доводят до метки дистиллированной водой. Раствор А содержит 100 мкг селена в 1 мл.
Более разведенные растворы селена, содержащие 10 мкг в 1 мл (раствор Б) и 0,1 мкг селена в 1 мл (раствор B) готовят последовательным разбавлением водой раствора А. Калибровочный раствор В готовят перед использованием;
набор индикаторной универсальной бумаги;
фильтры бумажные обеззоленные, белая лента.
Оборудование: флуориметр ЭФ-ЗМА с ртутнокварцевой лампой, набором кювет и светофильтров; электроплитка мощностью
214
800 Вт с несколькими степенями накаливания; водяная баня; делительные воронки на 100 и 250 мл; стаканы термостойкие на 50 и 100 мл.
