Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кондрахин И.П. -> "Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики" -> 109

Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.

Кондрахин И.П., Архипов А.В., Левченко В.И., Таланов Г.А., Фролова Л.А., Новиков В.Э. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики: Справочник. Под редакцией Сайтаниди В.Н. — М.: Колос, 2004. — 520 c.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка): metodvetkllabdia2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 103 104 105 106 107 108 < 109 > 110 111 112 113 114 115 .. 246 >> Следующая


Холостую пробу ставят так же, как опытную, но биологическую жидкость добавляют после инкубации вместе с 0,1 н. раствором йода. Измеряют при тех же условиях, что и опытную пробу, против воды.

Расчет активности гх-амилазы выражают в мг или г крахмала, гидролизованного 1 л биологической жидкости за 1 с инкубации при 37 °С.

Расчет ведут по формулам

X= elzhctKwm

где X — активность а-амилазы, мг/с • л; Е\ — экстинкция холостой пробы; — экстинкция опытной пробы; С — количество крахмала, введенного в опытную и холостую пробы (2 мг); / (160) — коэффициент пересчета на 1 с инкубации; К — коэффициент пересчета на 1 л биологической жидкости с учетом разведения.

229

Источник: 43.

Клиническое значение. Фермент амилаза (диастаза) осуществляет гидролитическое расщепление полисахаридов до декстринов и мальтозы. Богаты амилазой сок поджелудочной железы и слюна. В кровь фермент поступает главным образом из поджелудочной железы, поэтому активность амилазы в крови и моче повышается обычно при заболевании поджелудочной железы. При остром панкреатите она повышается в 10 раз и более. Кроме того, амилазная активность возрастает при перитоните, язвенной болезни свиней, собак и других животных, при заболеваниях почек. Повышение активности амилазы крови, как правило, сопровождается адекватным увеличением ее активности в моче. Однако при нефрозах, гломерулонефритах активность амилазы сыворотки крови увеличена, а в моче снижена.

Снижение активности амилазы в крови и моче наблюдается при гепатитах, дистрофиях печени, сахарном диабете, гипотиреозе, токсической диспепсии.

Нормативы активности а-амилазы в сыворотке крови, моче и других биологических субстратах целесообразно находить на здоровых животных-аналогах.

Примечание: Для получения плазмы крови используют только гепарин. Амилаза стабильна в сыворотке и плазме в течение 1 нед при комнатной температуре или при 2—8 °С, при минус 20 °С — 1 год.

Определение активности сорбитолдегидрогеназы (СДГ) в сыворотке крови по реакции с резорцином (метод Севела—Товарека). Принцип. D-сорбитол под действием фермента сыворотки в присутствии НАД превращается во фруктозу. При реакции фруктозы с резорцином образуется розово-красное окрашивание, интенсивность которого пропорциональна образовавшейся фруктозе,

Реактивы: трис-(оксиметил)-аминометан;

кислота хлористоводородная (HCl) 0,2 моль/л;

0,5 моль/л раствор D-сорбитола в 0,05 моль/л трис-буфере. 0,225 г D-сорбитола растворяют в 2,5 мл 0,05 моль/л раствора трис-буфера. Раствор стабилен в течение 4 нед при хранении в холодильнике;

0,05 моль/л трис-буфер, pH 8,8. 70,5 мг трис-(оксиметил)-ами-нометана растворяют в 2,5 мл дистиллированной воды, прибавляют 0,4 мл 0,2 моль/л раствора HCl. Доводят pH до 8,8, доливают дистиллированной водой до 10 мл. Раствор стабилен 1 год в случае хранения при комнатной температуре;

0,006 моль/л раствор никотинамидадениннуклеотида (НАД). 25 мг НАД растворяют в 4,5 мл трис-буфера. Раствор стабилен в течение 4 нед при хранении в холодильнике;

100 г/л (10 г/100 мл) раствор трихлоруксусной кислоты;

0,1%-ный раствор резорцина в 96%-ном этиловом спирте;

30%-ный раствор хлористоводородной кислоты (HCl);

0,2 моль/л раствор хлористоводородной кислоты (HCl);

154 ммоль/л раствор натрия хлорида;

230

калибровочный раствор фруктозы. 27 мг D-фруктозы растворяют в небольшом количестве 154 ммоль/л раствора натрия хлорида, переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят объем до метки 154 ммоль/л раствором натрия хлорида.

Оборудование: фотоэлектроколориметр; термостат; колбы мерные; секундомер.

Ход определения. В центрифужную пробирку вносят 0,1 мл 0,5 моль/л раствора D-сорбитола и 0,3 мл сыворотки, прогревают 5 мин при 37 °С, затем добавляют 0,2 мл 0,006 моль/л раствора НАД, предварительно прогретого при 37 °С и инкубируют 30 мин при 37 °С. Инкубацию прерывают добавлением 0,4 мл 10 г/100 мл раствора трихлоруксусной кислоты. Центрифугируют. В чистую пробирку вносят 0,5 мл надосадочной жидкости, 0,5 мл раствора резорцина, 1,5 мл 30%-ного раствора HCl, перемешивают и помещают в водяную баню при 80 °С точно на 8 мин, охлаждают. Возникающее розово-красное окрашивание измеряют на ФЭКе при длине волны 500—600 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 0,5 см против холостой пробы.

Холостую пробу ставят так же, как опытную, но раствор трихлоруксусной кислоты добавляют до инкубации.

Расчет активности фермента производят по калибровочному графику. Активность СДГ выражают в микромолях фруктозы, образовавшейся при инкубации 1 мл сыворотки в течение 1 ч при 37 °С, или в нмолях фруктозы, образовавшейся при инкубации 1 л сыворотки в течение 1 с при 37 °С. Для перевода мкмолей (ч. мл) в нмоль/с "л найденную величину умножают на коэффициент 16,67.

Для построения калибровочного графика из калибровочного раствора D-фруктозы готовят ряд разведений с добавлением реактивов, как указано в таблице 34.

34. Разведения фруктозы для построения калибровочного графика

№ пробирки
Калибровочный раствор D-фруктозы, мл
Предыдущая << 1 .. 103 104 105 106 107 108 < 109 > 110 111 112 113 114 115 .. 246 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed