Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Ход определения. Для анализа берут 1 г почвы, 50—500 мг кормов, 1 г волос, 1 мл цельной крови, 10 мл молока. Измельченный образец (почва, корма, волосы) или необходимый объем крови (молока) помещают в стаканчик на 50 или 100 мл, добавляют 5 мл концентрированной HNO3 и 0,1 г аммония персульфата. Стакан закрывают часовым стеклом и осторожно нагревают на электроплитке. После упаривания воды и частичного разложения материала добавляют 5 мл концентрированной азотной кислоты, 3 мл концентрированной хлорной кислоты и нагревают до появления белых паров хлорной кислоты. Если раствор при этом остался темным или желтым, продолжают сильное нагревание раствора, добавляя осторожно по каплям в дымящую хлорную кислоту концентрированную азотную кислоту до полного обесцвечивания раствора. После этого стакан снимают с плитки, охлаждают, смывают стенки стакана 2—3 мл воды и снова нагревают стакан на плитке до появления паров хлорной кислоты. Нельзя при этом допускать выпаривания раствора досуха. На дне стакана должен оставаться остаток хлорной кислоты в количестве 0,5 мл.
Чтобы восстановить шестивалентный селен до четырехвалентного, к остатку после разложения добавляют 1 мл концентрированной соляной кислоты и нагревают раствор 10 мин на кипящей водяной бане. Затем раствор разбавляют водой до 20 мл.
Устанавливают pH 1 по универсальной индикаторной бумаге, вводя соответственно соляную кислоту или аммиак. Добавляют 2 мл 2%-ного раствора комплексона III, 2 мл раствора 2,3-ДАН и нагревают 5 мин на водяной бане. После охлаждения в течение 10—20 мин раствор переносят в делительную воронку, добавляют 10 мл перегнанного н-гексана и экстрагируют 1 мин. После разделения фаз нижний слой (водный) отбрасывают, а экстракт сливают в пробирку и используют для флуориметрического определения селена. После окончания экстрагирования серии образцов измеряют флуоресценцию органических растворов на флуориметре ЭФ-ЗМА со светофильтрами ФК-1 (первичный) и В2-2 (вторичный). Количество селена в пробе, выраженное в мкг, определяют по калибровочному графику.
Для построения калибровочного графика из стандартных растворов Б и В готовят разведения с содержанием 0,01, 0,02, 0,05, 0,1 и 0,2 мкг/мл селена. Затем в стаканчики на 50 мл вносят по 1 мл раствора селена, доводят объем до 20 мл 0,1 моль/л раствором соляной кислоты, устанавливают pH 1 и далее ведут анализ, как описано выше.
В каждой серии готовят холостую пробу, учитывают ее значение при расчете содержания селена.
215
Расчет ведут по формуле
где X — количество селена в образце, мкг/г (мкг/мл); С — содержание селена в образце, мкг; P — масса навески, г (мл).
Содержание селена в процентах вычисляют путем умножения найденного количества селена в мкг/г на 0,0001. Например, в образце содержание селена составило 0,25 мкг/г, это соответствует 0,25 ¦ 0,0001 = 0,000025 % или 2,5 • 10'5 %.
Источники: 14, 54.
Клиническое значение. Селен участвует во многих окислительно-восстановительных процессах, обладает антиоксидант-ным действием в составе активного центра глутатионпероксидазы. Этот фермент разрушает токсические пероксиды в тканях, благодаря чему предотвращается жировая дистрофия печени, беломышеч-ная болезнь и др. Данных о нормативах содержания селена в почве, кормах, крови, молоке и других биологических материалах с учетом зональных особенностей недостаточно. Содержание его в кормах колеблется, по данным различных авторов, от 0,01 до 20 мг на 1 кг сухого вещества корма, в цельной крови — от 5 до 18 мкг%, в сыворотке (плазме) — 0,036—0,068 мкг%, в печени — 0,3— 1,2 ч/млн, в волосах — 0,5—0,7 ч/млн.
Считают, что при содержании в кормах селена менее 0,01 мг/кг развивается беломышечная болезнь, возникает дистрофия печени, задержание последа, снижается продуктивность, замедляется рост и развитие. О недостатке в организме селена свидетельствуют низкие показатели этого элемента в крови, молоке, волосах, печени и мышцах.
Определение железа в сыворотке крови по цветной реакции с сульфонированным ?-фенантролином. Принцип. Белки осаждают трихлоруксусной кислотой, которая при прогревании разрушает также комплекс железа с трансферином. Для установления оптимальной величины pH, равной 4,8—5,0, добавляют аммония ацетат, а для восстановления всего железа — гидрозин. Двухвалентное железо образует окрашенный комплекс с ?-фенантролином, который переведен в сульфатированную форму добавлением хлор-сульфоновой кислоты.
Реактивы: 20 %-ная трихлоруксусная кислота;
аммония ацетат. 70 г аммония ацетата (CH3COONH4) растворяют в воде, объем доводят до 100 мл. Препарат гигроскопичен;
гидрозина сульфат, насыщенный раствор. 2,5 г препарата заливают 100 мл воды;
раствор сульфонированного ?-фенантролина. В пробирке к 100 мг ?-фенантролина (4,7-дифинил-1,10-фенантролина) приливают 0,5 мл хлорсульфоновой кислоты, нагревают на кипящей водяной бане 30 с, охлаждают и медленно приливают 10 мл воды.
216
После этого снова нагревают на водяной бане 5 мин и разбавляют 100 мл воды. Добавляют 5 моль/л NaOH, устанавливают pH 4 и доводят объем водой до 200 мл;
