Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
0,3 моль/л раствор соляной кислоты. В мерную колбу на 1 л вносят 24 мл концентрированной соляной кислоты (плотность 1,19) и доливают до метки бидистиллированной водой;
0,05%-ный раствор ПААФ. 50 мг реактива растворяют в 100 мл 96%-ного этилового спирта;
азотная кислота концентрированная (х. ч.);
5 моль/л раствор серной кислоты. 266,3 мл серной кислоты (плотность 1,84) доводят бидистиллированной водой до 1 л;
хлороформ;
калибровочный раствор кобальта основной. 0,4034 г кобальта хлорида (CoCl2 • 6H2O, х. ч.) растворяют в бидистиллированной воде, добавляют 5 мл концентрированной соляной кислоты и доводят объем бидистиллированной водой до 1 л. В 1 мл калибровочного раствора содержится 100 мкг кобальта;
рабочий калибровочный раствор кобальта. 1 мл основного калибровочного раствора разводят до 100 мл 0,3 моль/л раствором соляной кислоты. В 1 мл раствора содержится 1 мкг кобальта;
20%-ный раствор соляной кислоты. 48,2 мл соляной кислоты (плотность 1,19) доводят до 100 мл бидистиллированной водой.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; фарфоровые тигли или чашки; сушильный шкаф; весы аналитические; электроплитка; муфельная печь; водяная баня; бюретка на 25 мл; пипетки измерительные на 0,2, 1, 5 и 10 мл.
Ход определения. В фарфоровый тигель (или чашку) вносят 20 мл цельной крови, ставят на электроплитку и медленно обугливают. Далее озоляют в муфельной печи в течение 4 ч при температуре 500—550 °С. В теплый тигель приливают 2 мл 50%-ной азотной кислоты, тщательно перемешивают стеклянной палочкой, смывая приставшие к ней частицы бидистиллированной водой в тигель. Упаривают досуха на электроплитке или водяной бане, не допуская разбрызгивания содержимого. Тигель ставят в муфельную печь, доводят температуру до 500 °С и выдерживают в течение 1 ч. При наличии частичек угля обработку азотной кислотой повторяют. К золе приливают 2,5 мл 20%-ного раствора соляной кислоты и 5 мл бидистиллированной воды. Тигель накрывают часовым стеклом, ставят в водяную баню и кипятят 5 мин. Содержимое тигля фильтруют в мерную колбу на 25 мл. Тигель обмывают несколько раз бидистиллированной водой и объем доводят до метки.
В делительную воронку или пробирку с притертой пробкой на 45—50 мл вносят 10 мл раствора золы, 2,5 мл 20%-ного раствора натрия цитрата, 2,5 мл 3 моль/л раствора натрия ацетата, 1 мл рас-
205
твора ПААФ. Тщательно перемешивают после прибавления каждого реактива. Через 10 мин приливают 10 мл 5 моль/л раствора серной кислоты, перемешивают, добавляют 5 мл хлороформа из бюретки и встряхивают в течение 1 мин. Дают слоям жидкости хорошо разделиться, и нижний слой сливают в кювету с толщиной слоя в 1 см. При использовании пробирок с притертой пробкой нижний слой отбирают при помощи пипетки с грушей или отсасывают верхний слой при помощи водоструйного насоса. Фотометрируют при длине волны 570 нм в кювете с толщиной слоя 1 см против контроля.
Содержание кобальта вычисляют по калибровочному графику. В делительные воронки или пробирки с притертыми пробками вносят 0,2, 0,4, 0,8, 1,0, 1,5 и 2 мл рабочего калибровочного раствора кобальта. Объем доводят до 10 мл 0,3 моль/л соляной кислотой. Далее поступают, как и с образцом. В контроль вместо раствора кобальта вносят 0,3 моль/л раствор соляной кислоты.
По результатам измерений строят калибровочную кривую.
Расчет ведут по формуле
A V-100
где X — количество кобальта, мкг%; А — количество кобальта, найденное по калибровочной кривой, мкг; V — объем раствора золы, мл; В — количество крови, мл; С — количество раствора золы, взятое на анализ, мл; 100 — коэффициент для пересчета в мкг.
Источники: 49, 52.
Клиническое значение. Кобальт — составная часть витамина В12, который непосредственно участвует во многих обменных процессах в организме, в частности, он необходим для нормального кроветворения (активирует синтез протопорфирина), участвует в синтезе метионина, в процессе переноса кислорода. Кобальт необходим для жизнедеятельности микрофлоры рубца. Он ак-тивирующе влияет на щелочную фосфатазу костной ткани. Поэтому его недостаток приводит к нарушению гемопоэза, усвоения питательных веществ корма, задержке роста и развития, снижению продуктивности и воспроизводительной функции, появлению ги-покобальтоза, остеодистрофии, анемии, стеатозу печени и другим болезням.
Содержание кобальта в крови колеблется от 2,5 до 5,0 мкг% (0,43—0,85 мкмоль/л), в плазме крови 0,5—0,7 мкг% (0,085— 0,12 мкмоль/л), в молоке 1—4 мкг% (0,17—0,68 мкмоль/л). Снижение уровня кобальта в крови отмечают при его недостаточном поступлении с кормом и водой, плохом усвоении вследствие расстройства деятельности желудочно-кишечного тракта. Низкий уровень кобальта наблюдается при гипокобальтозе, гиповитаминозе Ві2, алиментарной и экзотической остеодистрофиях, уровс-кой болезни.
206
Определение йода, связанного с белком (СБЙ), в сыворотке крови по Акланду в модификации С. В. Силаевой. Принцип. Иод в присутствии церия арсената образует окрашенное соединение, интенсивность которого измеряют на фотоэлектроколориметре.