Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
идентификации микроорганизмов.
Демонстрация
1. Различные виды вакцин, анатоксинов, иммуноглобулинов и иммунных
сывороток. Адъюванты.
Задание для выполнения лабораторной работы
1. Приготовить стафилококковую аутовакцину.
2. Определить силу антитоксической сыворотки по известному токсину с
помощью реакции нейтрализации токсина антитоксином (реакция флоккуляции).
123
Таблица 20. Реакция флоккуляции (форма протокола)
Ингредиенты, мл Hi пробирки
1 2 3 4 5 6 7
Токсин, содержащий 20 Lf в 1 мл 2.0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0
Исследуемая сыворотка 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,6
Инкубация при 45°С в течение 30 мин
Результаты по "инициальной" флоккуляции
Этапы приготовления стафилококковой аутовакцины. Убитую аутовакцину
приготовляют из штамма возбудителя, выделенного непосредственно от
больного
1. Посев стафилококка в пробирку со скошенным питательным агаром.
2. Проверка чистоты выросшей культуры (микроскопия мазка).
3. Получение маточной взвеси микробных клеток путем смыва культуры 5 мл
изотонического раствора хлорида натрия.
4. Прогревание бактериальной взвеси на водяной бане при 70-80°С в течение
часа.
5. Контроль на стерильность (высев из прогретой "взвеси на питательные
среды).
6. Стандартизация вакцины по оптическому стандарту: 1 мл прогретой
микробной взвеси разводят определенным количеством стерильного
изотонического раствора хлорида натрия, сравнивая ее мутность с мутностью
оптического стандарта (1 млрд/мл); остальной объем взвеси бактерий
разводят, добавляя соответствующее количество изотонического раствора
хлорида натрия.
Реакция флоккуляции. В результате взаимодействия токсина или анатоксина с
антитоксической сывороткой выпадают хлопья флоккулята. Наиболее
интенсивная и ранняя ("инициальная") флоккуляция происходит в пробирке,
где антиген и антитело содержатся в эквивалентных соотношениях.
124
Реакцию ставят в два этапа. 1. По стандартной сыворотке устанавливают
количество Lf (Limes flocculationis) в 1 мл токсина. Lf токсина
определяется его количеством, которое дает "инициальную" флоккуляцию с
международной единицей (ME) сыворотки. Установив силу токсина, приступают
к определению силы сыворотки.
2. Известной силы токсин и испытуемую антитоксическую сыворотку разливают
в пробирки в определенном объеме, как показано в табл. 20. Пробирки
выдерживают в водяной бане при 45°С в течение 30 мин до выпадения хлопьев
в одной из них. "Инициальная" флоккуляция проявляется в той пробирке, где
количество токсина соответствует количеству международных единиц
сыворотки. Например, если флоккуляция произошла в 3-й пробирке, значит в
0,4 мл сыворотки находится 40 ME. Следовательно, 1 мл сыворотки содержит
40:0,4-100 ME.
ЧАСТНАЯ МЕДИЦИНСКАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ И ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ВАЖНЕЙШИХ ИНФЕКЦИОННЫХ
ЗАБОЛЕВАНИЙ И КЛИНИЧЕСКАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
В данном разделе изложена лабораторная диагностика бактериальных,
грибковых и вирусных инфекций1, которая проводится для установления
этиологической и патогенетической роли выделенных из организма больных
микробов, определения иммунологических сдвигов и аллергических состояний,
выбора эффективных химиотерапевтических и иммунологических препаратов.
Особое значение при этом имеет диагностика заболеваний, вызванных
условно-патогенными бактериями и грибами рода Candida, развитие которых
связано с резким снижением иммунологической реактивности организма,
интенсивной антибиотикотерапией и другими причинами. Подобные инфекции
нередко возникают у больных, госпитализированных в хирургические,
терапевтические, детские и другие отделения, а также среди новорожденных
в акушерских клиниках. В этих случаях инфекции называют
внутрибольничными, или госпитальными, а раздел микробиологии, изучающий
условно-патогенные и некоторые патогенные бактерии - возбудители
госпитальных и других форм инфекций, - клинической микробиологией.
С целью приближения проводимых студентами диагностических
микробиологических исследований к практической деятельности лечащего
врача и решения частных вопросов клинической микробиологии
рассматриваемые микроорганизмы сгруппированы с учетом патогенетических и
эпидемиологических признаков вызываемых ими заболеваний и подразделены на
возбудителей раневых, гнойных, воздушно-капельных, кишечных, зоонозных,
кровяных, трансмиссивных и венерических инфекций. Это дает возможность
обосновать выбор материала и направление микробиологического
исследования,
1 Лабораторная диагностика протозойных инфекций изложена в учебнике В. Д.
Тимакова, В. С. Левашева и Л. Б. Борисова "Микробиология" (М., 1983).
126
исходя из предварительного клинического диагноза болезни.
Полученные лабораторные данные необходимы лечащему врачу для постановки
окончательного диагноза заболевания и назначения рациональной
антибиотико- и иммунотерапии. Врач-эпвдемиолог использует результаты
микробиологических и иммунологических исследований для проведения
эпидемиологического анализа заболеваемости с целью установления источника
