Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
неизвестного возбудителя или индикации его антигенов в исследуемом
патологическом материале. Соответственно используют стандартные
(коммерческие) эритроцитарные диагностикумы или суспензионные антитела,
полученные путем сенсибилизации обработанных танином (танизированных)
эритроцитов антителами. В лунках пластмассовых пластин готовят
последовательные разведения сыворотки больного, ориентируясь на
диагностический титр. Затем в каждую лунку вносят одинаковый объем (0,05
мл) 3% суспензии нагруженных антигеном эритроцитов - соответствующего
эритроцитарного диагностикума. Через 2 ч инкубации при 37°С учитывают
результат, оценивая внешний вид осадка эритроцитов (без встряхивания):
отрицательная реакция - осадок эритроцитов в виде компактного диска или
колечка с ровными краями на дне лунки, положительная реакция -
характерный кружевной вид осадка эритроцитов, тонкая пленка с неровными
краями (рис. 53).
Реакция Кумбса. Для выявления неполных антител, например к резус-антигену
эритроцитов в сыворотке беременной, реакция ставится в два этапа: ,1) к
двукратным разведениям испытуемой сыворотки добавляют эритроциты,
содержащие резус-антиген, и выдерживают при 376С в течение часа; 2) к
тщательно отмытым после первого этапа эритроцитам добавляют кроличью
античеловеческую антиглобулиновую сыворотку (в заранее оттитрованном
рабочем разведении). После инкубации в течение 30 мин при 37°С результаты
оценивают по наличию гемагглютинации (положительная реакция). Контроли
ингредиентов реакции: 1) антиглобулино-вая сыворотка + заведомо
сенсибилизированные эритроциты;
ill
Рнс. 52. Реакция агглютинации на стекле. а - наличие агглютинации; б -
отсутствие агглютинации.
Рнс. 53. Реакция пассивной гемагглютинации (схема). Эр - эритроциты; А г
- антиген; Ат - антитело.
2) нормальная сыворотка + эритроциты + антиг лобулиновая
сыворотка; 3) исследуемая сыворотка + эритроциты (без резус-антигена) 4-
антиг лобулиновая сыворотка (рис. 54).
Тема 19. СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ.
РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ И ЕЕ ВАРИАНТЫ. ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНЫЙ МЕТОД
Программа занятий
1. Реакция преципитации: механизм, варианты постановки (кольцепреци-
питация, преципитация в геле, иммуноэлектрофорез) и их диагностическое
применение.
2. Иммунофлюоресцентный метод Кунса.
112
<**> * 1-
Неполные йт анти Rh
Рнс. 54. Реакцня Кумбса (схема).
Реакция преципитации характеризуется осаждением специфических
мелкодисперсных антигенов эквивалентным количеством антител в присутствии
электролита. Выпадение нерастворимого комплекса антиген - антитело в виде
осадка наблюдается лишь при эквивалентных соотношениях ингредиентов.
Образовавшийся комплекс может раствориться в избытке антигена или
антител. Антиген должен иметь характер прозрачного коллоидного раствора.
В лабораторной диагностике инфекционных заболеваний реакция преципитации
служит главным образом для выявления или идентификации антигена
(преципитиногена) по известной преципитирующей сыворотке, содержащей
антитела (преципитины). Для приготовления коллоидных антигенов,
участвующих в реакции преципитации, используют различные методы их
экстракции из исследуемого материала: физические, химические и
биологические.
из
(c) *
Светящийся
комплекс
а
Светящийся
комплекс
6
Рис. 55. Иммунофлюоресцентный метод Кунса (схема).
о -прямой метод; б-непрямой метод; АГ- антиген; Ат - антитело; АГС -
антигло-булиновая сыворотка.
Иммунофлюоресцентный метод. Обнаружение бактериальных и вирусных
антигенов в инфицированных материалах, тканях животных и культурах клеток
при помощи флюоресцирующих антител (сывороток) получило широкое
применение в диагностической практике. Иммунофлюоресцентный метод
относится к экспресс-диагностике, не уступая другим серологическим
реакциям по чувствительности и специфичности (рис. 55).
Рнс. 56. Иммунофлюоресцентный метод Кунса. Выявление вируса корн в
клетках инфицированной им тканевой культуры.
114
Приготовление флюоресцирующих сывороток основано на способности некоторых
флюорохромов (например, изотиоциа-ната флюоресцеина) вступать в
химическую связь с сывороточными белками, не нарушая их иммунологической
специфичности.
При прямом иммунофлюоресцентном методе Кунса специфические
флюоресцирующие антитела, связавшиеся с микробными антигенами, образуют
комплексы, которые светятся при люминесцентной микроскопии препаратов
(рис. 56). Недостатком прямого метода Кунса является необходимость
приготовления широкого набора флюоресцирующих специфических сывороток
против каждого изучаемого антигена.
Непрямой метод предусматривает использование одной универсальной
флюоресцирующей сыворотки - антиглобулино-вой, содержащей антитела только
против кроличьих глобулинов. В связи с тем что диагностические
антисыворотки содержат кроличьи глобулины (так как их получают путем
иммунизации кроликов), они реагируют с флюоресцирующей анагиглобулиновой
сывороткой в качестве антигена и вместе с тем соединяются с гомологичным
