Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Борисов Л.Б. -> "Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии" -> 44

Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.

Борисов Л.Б. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии — М.: Медицина, 1984. — 256 c.
Скачать (прямая ссылка): rukovodstvoklabzadaniyampomikroekonomiki1984.djvu
Предыдущая << 1 .. 38 39 40 41 42 43 < 44 > 45 46 47 48 49 50 .. 96 >> Следующая

исследуемым антигеном (микроорганизмом) как антитела. При этом на
образовавшемся комплексе (специфические антитела+исследуе-мый антиген)
фиксируются флюоресцирующие антиглобули-новые антитела, вызывая его
свечение при люминесцентной микроскопии.
Демонстрация
1. Иммунофлюоресцентный метод Кунса.
2. Иммуноэлектрофореграммы.
Задание для выполнения лабораторной работы
1. Отметить результаты титрования сыворотки, проведенного на предыдущем
занятии, определить титр антител и объяснить отрицательные результаты в
контрольных пробах, исходя из необходимости сочетания ингредиентов,
участвующих в реакции агглютинации.
2. Поставить реакцию кольцепреципитации для определения природы антигена
в исследуемом материале. Объяснить отрицательные результаты в контрольных
пробирках.
3. Отметить результаты реакции преципитации в геле, поставленной с целью
определения токсигенностн дифтерийной палочки с помощью антитоксической
сыворотки.
Методические указания
Реакция преципитации. Проводится с прозрачными коллоидными растворимыми
антигенами, экстрагированными из патологического материала, объектов
внешней среды и чистых культур бактерий. Один из распространенных методов
хими-
115
ческой экстракции антигенов бактерий - получение комплексного антигена по
Буавену с помощью гидролиза бактерий трихлоруксусной кислотой. В реакции
используются прозрачные диагностические преципитирующие сыворотки с
высокими титрами антител. За титр преципитирующей сыворотки принимают то
наибольшее разведение антигена, которое при взаимодействии с иммунной
сывороткой вызывает образование видимого преципитата - помутнения.
Реакция колъцепрецицитации. Ставится в узких пробирках (диаметр 0,5 см),
в которые вносят по 0,2-0,3 мл преципи-тирующей сыворотки. Затем
пастеровской пипеткой медлен- ^ но, по стенке, держа пробирку в наклонном
положении, наслаивают 0,1-0,2 мл раствора антигена. Пробирки осторожно
переводят в вертикальное положение. Результаты опыта протоколируют (табл.
17).
Таблица 17 Реакции преципитации с буавеновскнм антигеном (форма
протокола)
Ингредиенты, мл N° пробирки
1 2 3 4
Тифозная антисыворотка 0,1
Дизентерийная " - 0,1 - - .
Нормальная сыворотка - - 0,1 -
Изотонический раствор
хлорида натрия - - - 0,1
Исследуемый антиген 0,1 0,1 0,1 0,1
Результаты
Учет реакции производят через 1-2 мин. В случае поло- ' жительной реакции
в первой пробирке на границе между сывороткой и исследуемым антигеном
появляется преципитат в виде белого кольца. В остальных (контрольных)
пробирках преципитат не образуется (рис. 57).
Реакция преципитации в геле (агаре). Чашки заливают агаром, в котором
вырезают несколько луночек на равном расстоянии друг от друга. В
центральную лунку вносят сыворотку, содержащую антитела, в остальные -
различные испытуемые антигены или один и тот же антиген в различных
разведениях. При диффузии реагентов в агаре в зонах оптимальных
соотношений на месте встречи антигена и антител образуются мутные полосы
-дуги преципитации (рис. 58).
116
Рис. 57. Реакция преципитации.
/ - преципитирующая сыворотка + исследуемый материал; 2 - преципитирующая
сыворотка + гомологичный преципитиноген; 3 - преципитирующая сыворотка +
контрольный экстракт без антигена; 4 - преципитирующая сыворотка +
изотонический раствор хлорида натрия; 5 - нормальная сыворотка +
исследуемый антиген; € - нормальная сыворотка + + контрольный экстракт
без антигена.
В случае постановки реакции преципитации с различными разведениями
антигена можно установить титр преципитиру-ющей сыворотки - максимальное
разведение антигена, которое дает преципитацию с данной сывороткой. Одна
из разновидностей реакции преципитации в геле позволяет определять
токсигенность исследуемых бактерий (например, дифтерийной палочки) с
помощью антитоксической сыворотки. Для этого в чашку Петри на питательную
среду помещают полоску стерильной фильтровальной бумаги, пропитанную
антитоксической противодифтерийной сывороткой. Затем чашку подсушивают в
термостате и засевают испытуемыми культурами в виде штрихов,
перпендикулярных к полоске бумаги, на расстоянии 0,6-0,8 см от ее края. В
качестве контроля используют заведомо токсигенную культуру. Чашки
инкубируют при 37°С в течение суток. При наличии токсигенной культуры в
месте взаимодействия токсина с антитоксином образуются линии преципитации
в виде дуг (рис. 59).
Иммуноэлектрофорез. Исследование проводится в два этапа: 1)
электрофоретическое разделение исследуемого материала в агаре; 2)
иммунологический анализ. В агаре параллельно оси миграции
электрофоретических фракций вырезают траншеи, в которые вносят иммунную
сыворотку, содержащую антитела к исследуемым антигенам. В случае реакции
между антигенами и диффундирующими в агар антителами формируется
преципитат в виде дискретных дуг, соответст-
117
Рве. 58. Реакция преципитации в геле по Оухтерлони.
вукяцих индивидуальным системам антиген-антитело (см. рис. 58).
Предыдущая << 1 .. 38 39 40 41 42 43 < 44 > 45 46 47 48 49 50 .. 96 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed