Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
метод приготовления гербарного материала - немедленное помещение листьев,
стеблей или их частей в стерильный пакет из фильтровальной бумаги и
высушивание их в этом пакете. После высушивания листьев пакет помещают во
второй пакет, также стерильный, но из более плотной бумаги. В таком виде
материал можно хранить до исследования.
Материал помещают во влажную камеру, образцы просматривают под
бинокулярной лупой. Выделение грибов производят через сутки и более.
XVIII.7.1.5. ВЫДЕЛЕНИЕ ИЗ ЗЕРНА ХЛЕБНЫХ ЗЛАКОВ И СЕМЯН
При выделении видов грибов, развивающихся во внутренних тканях зерна или
семян, пользуются в основном методом влажной камеры. Зерна или семена
после поверхностной дезинфекции укладывают на поверхность фильтровальной
бумаги с интервалом 0,5-1,0 см; из одной исследуемой партии зерна
среднего образца берут 100-1000 зерен. При этом следует принимать во
внимание зараженность грибами и их пора-женность. Зараженность определяют
числом грибных зародышей в определенном количестве зерна; пораженность
характеризуется степенью роста тех или иных видов грибов и поражения ими
исследуемого субстрата. Зараженность определяют путем посева смыва
определенной навески зерна или семян и последующего пересчета количества
грибных организмов на единицу массы зерна.
XVIII.7.1.6. ВЫДЕЛЕНИЕ ИЗ КЛУБНЕЙ, ЛУКОВИЦ, КОРНЕПЛОДОВ
Выделение производят непосредственно из исследуемого материала либо после
накопления на тканях этих органов мицелия грибов или их спороношения во
влажной камере. В том и другом случае необходима поверхностная
стерилизация и предварительный отмыв исследуемого материала от частиц
почвы. При непосредственном выделении срезают стерильно небольшой кусочек
на границе пораженной и здоровой ткани и помещают его на кислый сусловый
агар. Для посевов делают серию срезов из разных мест здоровой и в разной
степени пораженной ткани.
425
XVIII.7.2. СЕЛЕКТИВНЫЕ, ИЛИ "ПРИМАНОЧНЫЕ", МЕТОДЫ
Для выделения паразитных фитопатогенных грибов, не растущих на обычных
питательных средах, используют растения-индикаторы, чувствительные к
поражению, культуру тканей или органов растений, проростки или семена и
стерильные среды, приготовленные на их основе. Например, чистая культура
Phytophthora infestans может быть выделена при культивировании на
стерильной ткани клубня картофеля, Erysiphe graminis - на проростках
ячменя, Puccinia graminis f. tri-cini - на проростках пшеницы в стадии 2-
3 листьев. Моноспоровую культуру можно получить заражением ткани или
растения каплей, содержащей одну спору.
XVI 11.7.3. МЕТОД ЭЛЕКТИВНОГО ВЫДЕЛЕНИЯ
СПЕЦИФИЧЕСКИХ ВИДОВ
Метод заключается в погружении в почву чувствительных к специфическим
видам стерильных или нестерильных частей растений с последующим изъятием
их и микологическим анализом. В этом случае необходимо забирать анализы в
разные сроки и помещать во влажную камеру для выделения грибов,
осуществляющих первичное заселение погружаемых частей растений,
XVIII.7.4. МЕТОД "КОНТАКТНЫХ СТЕКОЛ"
Метод выделения микроорганизмов непосредственно из места их расположения
в почве (метод Росси - Холодного). Стерильные предметные стекла прижимают
к трещинам свежей почвы. Через несколько дней стекла встряхивают для
освобождения от крупных комочков почвы и помещают на поверхность агаровой
среды в чашку Петри стороной, соприкасавшейся с почвой. Выросшие грибы
просматривают под малым увеличением микроскопа и после определенного
периода инкубации колонии переносят на свежую среду [210].
XVIII.8. ПОДДЕРЖАНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР
После выделения культур и своевременной их очистки от посторонних
организмов следует поддерживать чистые культуры в жизнеспособном
состоянии. Простейший способ поддержания чистых культур - пересев их
через определенное время в. пробирки на косяки свежей агаровой среды.
Периодичность пересевов зависит от вида гриба и определяется временем его
выживаемости. Следует учитывать, что длительное выращивание грибов на
искусственных средах может привести к изменению их свойств, в частности к
потере патогенности или снижению вирулентности.
XVIII.9. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ПАТОГЕНОВ [210, 299, 461, 470]
Наряду с выбором методов выделения грибов большое значение имеет подбор
благоприятных сред для получения чистых культур, поддержания их
жизнеспособности в целях дальнейшего изучения. Состав основ-
426
ных природных синтетических и полусинтетических сред, используемых для
культивирования фитопатогенных грибов, приведен в приложении 8.
XVIII.10. СПЕЦИАЛИЗАЦИЯ ФИТОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ [131г 141, 210, 369, 461]
Специализация фитопатогенных грибов - приуроченность их к определенному
виду, сорту питающего растения, способность (приспособленность) к
паразитированию на одном или нескольких видах, сортах. Филогенетическая
специализация патогена - избирательная способность его к поражению
определенного набора видов питающих растений. Возбудители болезней с
широкой специализацией называются широкоспециализированными, например
