Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
1. Организмы, развивающиеся на поверхности растений, обнаруживают прямым
микроскопированием под бинокулярной лупой (увеличение до 50), методом
отпечатков, фиксации.
2. Грибы, развивающиеся под кутикулой, обнаруживают путем окрашивания гиф
с удалением или без удаления кутикулы. Кутин и межклеточное вещество
удаляют последовательным погружением препаратов растительной ткани в
растворы кутиназы и пектиназы. Затем препарат окрашивают метиленовым
синим; гифы окрашиваются в синий цвет.
421
3. Эндофитные грибы обнаруживают в продольных и поперечных окрашенных
метиленовым синим срезах фиксированных или свежих образцов.
Обычно применяют фиксатор следующего состава: 90 мл 50%-ного этилового
спирта; 5 мл ледяной уксусной кислоты; 5 мл формалина. Препараты
фиксируют, нумеруют, просматривают под микроскопом, делают серию снимков.
Образцы можно хранить в жидкой среде, предварительно обработав их
растворами А и Б. Состав раствора А: 100 мл глицерина; 50 г молочной
кислоты; 50 г фенола; 20 г ацетата меди; до 1 л водопроводной воды.
Состав раствора Б: 50 мл глицерина; 25 мл молочной кислоты; 25 мл
формалина; до 1 л водопроводной воды.
Образец погружают на 4-5 дней в раствор А, потом в раствор Б, последний
меняют несколько раз до исчезновения голубовато-зеленой окраски. Образец
хранят в растворе Б с указанием даты, места сбора растения, патогена. При
наличии пикнид или плодовых тел, погруженных в ткани, делают срезы ткани
бритвой. Для этого подготовленный кусочек пораженной ткани вкладывают в
надрез-расщелину бузины. Срезы ткани помещают в капли воды на предметное
или часовое стекло.
XVIII.5.1. ОБНАРУЖЕНИЕ МИЦЕЛИЯ ПЫЛЬНОЙ ГОЛОВНИ
В ЗАРОДЫШАХ
Для отделения зародыша от зерна образцы исследуемых семян помещают на
ночь в 10%-ный раствор щелочи (NaOH). Затем отдельные зародыши собирают и
промывают несколько раз кипящей водой, обесцвечивают в кипящем
лактофеноле (молочная кислота, фенол, глицерин, вода в соотношении 1 : 1
: 1 : 5) в течение 2-3 ч. Лактофенол обесцвечивает зародыши до такой
степени, что под микроскопом легко обнаруживается мицелий. Последний
обычно окрашивают метиленовым синим (50 г на 100 г лактофенола) при
кипячении в течение 2-3 мин с последующей промывкой чистым лактофенолом.
Мицелий окрашивается в голубой цвет [210].
XVIII.5.2. ОБНАРУЖЕНИЕ МИЦЕЛИЯ ПЫЛЬНОЙ ГОЛОВНИ
В ПРОРОСТКАХ
Проростки испытывают в стадии 3-5 листьев (в возрасте 14- 21 дней).
Срезают верхушку стебля, обесцвечивают в течение 15 мин в кипящем
лактофеноле, содержащем 0,001-0,005% трипанового синего. Затем точку
роста погружают в лактофенол и определяют наличие мицелия пыльной головни
под микроскопом.
XVIII.5.3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОНИКНОВЕНИЯ
И ЛОКАЛИЗАЦИИ YERTICILLIUM DAHLIAE -
ВОЗБУДИТЕЛЯ УВЯДАНИЯ В ПРОРОСТКАХ ХЛОПЧАТНИКА
Поверхностно простерилизованные семена хлопчатника высевают в чашку Коха
или растильню с почвой, предварительно заражая их грибом. Через
определенные интервалы времени проростки просматривают визуально и
микроскопически на наличие в тканях стебля и листьев гиф гриба, конидий и
хламидоспор. Растения фиксируют обычно 70%-ным этанолом и затем
окрашивают срезы раствором водного синего в 40%-ной уксусной кислоте,
422
XVIH.6. УЧЕТ БОЛЕЗНИ [131]
Маршрутные обследования проводят обычно 3 раза за вегетационный период:
полевых и овощных культур - в период появления всходов, в период цветения
и перед уборкой; плодовых и ягодных - сразу после цветения, через месяц
после цветения и перед уборкой урожая. На стационарных участках
наблюдения проводят систематически в течение вегетационного периода
каждые 10 дней. Выбор участка, количество учетных растений или делянок,
размещение их на площади и т. д. зависят от характера болезни и вида
обследуемой культуры. Результаты учета болезней растений выражают
следующими показателями.
Распространенность болезни - количество больных растений или органов
растений (листьев, плодов, клубней), выраженное в процентах общего числа
обследованных растений на участке определенной площади. Определяется по
формуле Р = п * 100/М%, где N - общее число обследованных растений; п -
количество больных растений [131].
Интенсивность, или степень, поражения растений - качественный показатель
болезни. Определяется площадью пораженной поверхности растения или
отдельных его органов. Выражается либо в процентах, либо в баллах, для
чего используют специальные условные шкалы. Наиболее распространена
четырехбалльная шкала со следующими градациями:
Степень поражения
Балл поверхности расте-
ния, %
0 0
1 10
2 11-25
3 26-50
4 Свыше 50
Развитие, или индекс, болезни выражают в процентах и находят по формуле R
- 2 (ab) • 100/М/С, где 2 (ab) - сумма произведений числа больных
растений (а) на соответствующий им балл поражения (Ъ)\ N - общее
количество просмотренных растений (здоровых и больных); К - высший балл
шкалы учета. Индекс болезни отражает среднюю интенсивность поражения (для
отдельного растения, сорта, участка или определенной территории).
