Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
и копыта животных, перья птиц и т. п. Суть этого метода заключается в
следующем. Почву слегка увлажняют и рассыпают по дну стерильной чашки
Петри. Затем сверху раскладывают простерилизованный субстрат - приманку.
После чего чашки Петри помещают во влажную камеру, периодически
просматривают и появившуюся грибницу отвивают в пробирки на питательную
среду. Для выделения из почв копрофильных грибов обычно используют
экскременты животных, кератиноразрушающие грибы изолируют на обезжиренный
стерильный волос, виды рода Fusarium - на стерильные ломтики картофеля.
Обитающие в почве хитридиевые, сапролег-ниевые и другие грибы, образующие
зооспоры, чаще всего выделяют на семена конопли, кусочки вареных яиц,
мертвых насекомых и т. д. Осуществляют это следующим образом. В
стерильные чашки Петри кладут по 10 г исследуемой почвы, заливают
стерильной водой, добавляют приманку (желательно несколько разных видов)
и ставят в термостат для инкубации.
Другая группа методов предусматривает применение стеклотехники разной
степени сложности для обнаружения и выделения грибов, находящихся в почве
в активном состоянии. К ним относятся метод обрастания стекол Холодного
[541], метод предметных стекол-ловушек Ля-Туш [664], методы решетчатых
экранизирующих погруженных пластинок [800], капиллярных педоскопов [348],
погруженных (иммерсионных) трубок Честерса [540]. Кроме того, имеется ряд
модификаций указанных выше методов, которые содержат лишь частичные
видоизменения и сводятся в основном к покрытию разного рода стеклянных
устройств питательной средой [71, 394, 715, 767]. Суть этих методов
сводится к тому, чтобы в отверстия в стеклянных устройствах разной
степени сложности смог проникнуть растущий мицелий гриба. Ввиду того что
всеми перечисленными выше методами можно выполнить сравнительно небольшой
объем работы и они не позволяют изолировать и идентифицировать отдельные
виды грибов, мы на них не останавливаемся. Эти методы детально изложены в
[299].
436
XIX.1.3. ВЫДЕЛЕНИЕ ГРИБОВ С КОРНЕЙ РАСТЕНИЙ И ДРУГИХ РАСТИТЕЛЬНЫХ
ОСТАТКОВ
XIX.1.3.1. МЕТОД ВОДНЫХ смывов
Большинство почвенных грибов аккумулируется вблизи корней растений. С
поверхности корней растений и почвы, находящейся в непосредственной
близости от них, грибы обычно изолируют методом водных смывов [315]. Этот
метод пригоден и для выделения грибов с поверхности опавших листьев,
валежника и других растительных остатков. С корней или других
растительных остатков осторожно стряхивают почву, ножницами,
предварительно погруженными в банку со спиртом и обожженными над пламенем
горелки, разрезают корни на отрезки 3-5 см, которые стерильным пинцетом
переносят (обычно по 3-4 отрезка) в заранее подписанные колбы, содержащие
по 100 мл стерильной воды, и встряхивают в течение 5 мин. Затем по 1 мл
полученной суспензии высевают в чашки, предварительно приготовив нужное
разведение (приготовление разведений см. в разделе XIX. 1.2.2.).
Суспензию 3-го или
4-го разведения разливают в 3 или 4 чашки Петри по 1 мл в каждую,
заливают расплавленной, но охлажденной агаризованной питательной средой и
перемешивают легкими покачиваниями до остывания агара. После этого чашки
Петри ставят в термостат для инкубации. Оставшуюся в колбе водную
суспензию почвы осторожно отфильтровывают через предварительно взвешенный
и надписанный бумажный фильтр, который высушивают до постоянной массы для
определения сухой массы почвы, смытой с поверхности корней. В колбу с
корнями повторно вливают 100 мл стерильной воды, с которой поступают так
же, как и с первой порцией. Обычно делают 5-10 смывов. На питательные
среды в чашки Петри чаще всего высевают разведения 1-го, 5-го и 10-го
смывов. Основная масса грибных зародышей отделяется с корней в первые
смывы. После 10 смывов грибных зародышей на поверхности корней остается
мало.
Метод водных смывов с растительных остатков прост, удобен и позволяет без
особого труда выделять большое количество грибов разных видов.
XIX.1.3.2. МЕТОД ПОЛУЧЕНИЯ СПОР СУХОСПОРОВЫХ
СУМЧАТЫХ ГРИБОВ
Выделение в чистые культуры аскоспор сумчатых грибов, плодовые тела
которых развиваются на поверхности или внутри растительных и каких-либо
других тканей, например на корнях растений, затруднено сильным
инфицированием образцов бактериями, сапрофитными быстрорастущими грибами
и другими организмами. Стерилизация образцов химическими веществами или
пламенем, как правило, убивает и исследуемые объекты, а многоразовая
промывка стерильной водой обычно не дает желательных результатов.
Предложен [212] метод получения спор сухоспоровых сумчатых грибов с
последующим перенесением их на питательные среды, рассчитанный на виды
грибов с активным споро-отделением, плодовые тела которых снабжены
отверстием. Этим методом можно получать также споры базидиальных грибов с
открытым гимено-фором и односпоровые культуры разных видов грибов. Метод
не пригоден для выделения грибов, споры которых погружены в слизь или
