Культура животных клеток - Конки Д.
ISBN 5-03-000359-2
Скачать (прямая ссылка):
Оказалось, что получаемая антисыворотка характеризуется реакцией лишь с экстрактами предстательной железы при иммунодиффузии и не взаимодействует с аналогичными препаратами других тканей. Более того, количественные исследования, проведенные после разработки чувствительного иммунофермент-ного метода анализа для антигена предстательной железы, показали, что линии клеток человека, полученные из карциномы предстательной железы (LNCaP и РС-3), экспрессируют этот антиген, а в линиях клеток, полученных из других тканей, этот антиген отсутствует.
Во многих лабораториях были получены и охарактеризованы гибридомы, продуцирующие моноклональные антитела с высокой степенью тканевой специфичности. Так, например, в работе Копровски с сотрудниками [40] сообщалось о выделении 19 гибридом, 15 из которых продуцируют антитела, реагирующие лишь с линиями клеток карцином прямой или толстой кишки. Метзгар с сотрудниками [41] получили 5 гибридом, продуцирующих антитела к линиям клеток опухолей поджелудочной железы человека. В этой работе отмечена некоторая перекрестная реактивность с другими опухолевыми тканями или линиями клеток, но по крайней мере в одном случае (антитела DU-PAN-1) эта перекрестная реактивность ограничена клетками карциномы переходного эпителия мочевого пузыря. Известны также гибридомы, продуцирующие антитела, позволяющие различать В- и Т-клетки, а также субклассы Т-клеток человека [42], и к настоящему времени в свободной продаже имеются многие реагенты и наборы для решения этих задач.
Вследствие широкой доступности моноклональных реагентов исследователь вправе ожидать, что наборы для идентификации клеток из многих тканей войдут в практику лабораторных исследований. Эти антитела в конечном счете вытеснят гетерогенные антисыворотки, используемые в настоящее время в этих целях.
4.4.4. Биоким ческо* тестирование специфических функций кл*ток
Принадлежность большого числа линий и штаммов клеток к той или иной индивидуальной ткани или опухоли может быть показана по способности клеток к специфическому синтезу или наличию специфического метаболического пути. Способов такой проверки слишком много, чтобы их можно было рассмотреть здесь в деталях. Ограничимся лишь несколькими примерами линий и штаммов, в которых выявляется экспрессия специфических функций.
Яшумура с сотрудниками [43] использовали перевиваемые опухоли мыши и крысы в качестве источников для получения четырех клонированных штаммов функционально активных клеток. На ранних стадиях получения этих клонов для индукции роста требовались чередующиеся периоды трансплантации клеток организмам-хозяевам и поддержания этих клеток в культуре. Один штамм, получивший название GHi и выделенный исходно из опухоли гипофиза MtT/W5, секретировал гормон роста, вызывал рост хозяев при прививке интактным животным, или животным, у которых удален гипофиз. Второй штамм 1-10 был получен из опухоли клеток Лейдига Н10119, перевиваемой на мышах BALB/cI. Прогестерон и его производное 20а-окси-4-прегнен-3-он оказались основными стероидами, секретируемыми этими клетками в культуральную среду. Процесс высвобождения этих гормонов оказался нечувствительным к гормону, стимулирующему интерстициальные клетки, но усиливался циклическим АМР. Культивируемые штаммы мышиных клеток М-3 и Y-1 были получены соответственно из меланомы Клаудмана S91 и из опухоли надпочечника. Клетки М-3 индуцировали развитие меланом при прививке определенным животным (мыши CXDBA). Клетки надпочечника (штамм Y-1) чувствительны к АКТГ и секретируют стероидные гормоны.
Метод клонирования успешно применяется и для получения штаммов функционирующих клеток из нормальных тканей. Примером служит штамм клеток щитовидной железы крысы (клетки FRTL). Эти клетки секретируют в культуральную среду тироглобулины, повышая концентрацию иодидов в 100 раз [44]. Для культивирования этих клеток используется среда F-12M, содержащая инсулин, тиротропин, трансферрин, гидрокортизон, соматостатин, глицил-Ь-гистидил-Ь-лизинацетат и всего 0,1—0,5% телячьей сыворотки. Как уже говорилось, низкое содержание сыворотки в среде может быть критичным на ранних стадиях отбора клеток функционального типа. Из нормальных мышц мышей и крыс получены также штаммы мио-генных клеток. В этих случаях в качестве биохимического маркера может быть использована удельная активность креатип-фосфокиназы [45].
Линии функциональных клеток могут быть также получены из различных опухолей человека. Линия клеток MCF-7, например, получена из плеврального выпота больной с аденокарциномой молочной железы. Клетки этой линии сохраняют некоторые признаки эпителия молочной железы, например чувствительность к опосредуемому цитоплазматическими рецепторами действию эстрадиола и способность к образованию куполообразных структур в плотном монослое [46]. Клетки BeWo представляют собой линию трофобластных клеток человека, полученных из злокачественной хориокарциномы. Оказалось, что
клетки этой линии секретируют целый ряд плацентарных гормонов, включая хорионический гонадотропин человека, плацентарный лактоген и стероиды (эстрон, эстрадиол, эстриол и прогестерон) [8]. Дополнительные данные о линиях дифференцированных клеток и получении их биохимических характеристик можно найти в работах [7, 8 и 47].
