Биогенный магнетит и магниторецепция. Новое о биомагнетизме. Том 1 - Киршвинк Дж.
ISBN 5-03-001274-5
Скачать (прямая ссылка):
После того как минералы обнаружены и идентифицированы, можно видоизменить обработку с целью улучшения фиксации самих тканей. Поэтому имеет смысл испробовать все способы, рекомендуемые в методиках, чтобы убедиться в том, что применяемые процедуры и химические препараты соответствуют задачам исследования. Целесообразно поставить в начале работы следующие вопросы.
1. Не вызовут ли химические агенты, используемые при фиксации (фиксаторы, промывочные растворы, буферы, растворители), существенных изменений размеров, формы или даже общей минералогии неорганических материалов, присутствующих или предполагаемых в ткани? Это особенно важно в случае таких минералов, как кальцит и арагонит. В случае магнитных минералов вероятность такого влияния должна быть меньше.
2. Не лучше ли наблюдать минералы (электроноплотные по своей природе) в их исходном состоянии, когда окраска тяжелыми металлами или применение фиксаторов сведены к минимуму или вовсе отсутствуют?
3. Не вызывают ли минералогических изменений температурные и временные факторы, связанные с заключением образца в заливочную среду? Это вполне вероятно в случае находящихся в неустойчивом состоянии гидратов оксидов и гидроксидов железа.
4. Является ли оптимальным pH жидкости в секционном желобе микротома? Не могут ли некоторые минералы растворяться (или окисляться), когда срезы плавают на поверхности раствора перед перенесением их на сетку?
3. Изучение образца в микроскопе
Если образец подготовлен с соблюдением всех необходимых условий, он пригоден для исследования в электронном микроскопе. В этом разделе мы рассмотрим некоторые общие рабочие процедуры, которые могут иметь значение при исследовании минеральных материалов. Многие из этих процедур хорошо известны для одних, но могут показаться новыми для других. Их выполнение требует общего ознакомления с просвечивающим электронным микроскопом.
3.1. Подготовка микроскопа к работе
В отличие от большинства прежних приборов, современный просвечивающий электронный микроскоп представляет собой надежный, легкоуправляемый прибор, требующий минимальных усилий для получения высококачественных микрофотографий. Увеличение стабильности как электронной, так и механической системы позволяет хорошо работать на нем даже неопытному оператору. Тем не менее при исследовании большинства образцов и особенно некоторых минеральных образцов необходимо учитывать ряд факторов.
Прежде чем детально исследовать сетки с образцом, целесообразно убедиться в достаточной чистоте и хорошей юстировке оборудования. Для всех, кроме требующих большой точности и высокого разрешения, видов работ это легко делают в течение нескольких минут, и это время, затраченное вначале, обычно окупается в дальнейшем.
После включения электронного пучка правильную юстировку нити накала и диафрагмы конденсорной линзы можно проверить, фокусируя линзу на экран при небольшом недокале катода. При хорошо отъюстированной нити накала на экране наблюдают симметричное изображение кончика нити, а сцентрированная диафрагма конденсора обеспечивает стабильное положение пучка вблизи центра экрана при небольших дефокусировках конденсорной линзы. Эти две регулировки сберегают время и силы при дальнейшем исследовании, особенно когда возникает необходимость в точной настройке освещения для фотографирования. При нарушении центровки нитей или диафрагм конденсора освещение становится плохим или неравномерным.
Общая центровка остальных линз считается удовлетворительной, если при изменении увеличения или фокусировки изображение сохраняет свое положение в центре смотрового экрана. (У многих приборов эти центровки фиксированны и требуют лишь незначительной подгонки либо вообще не нуждаются в ней.)
Следует проверить центровку диафрагмы линзы объектива и ее влияние на качество изображения. Это легко сделать (в присутствии препарата) путем снижения увеличения до нуля, т. е. выведением микроскопа в дифракционный режим со светящейся точкой в центре экрана. Общее фоновое рассеяние электронов, вызываемое веществом образца, формирует изображение диафрагмы объектива вокруг центральной сфокусированной дифракционной точки. Изображение диафрагмы должно быть кольцевым, свободным от «грязи» и симметричным относительно дифракционной точки.
Чистоту диафрагмы объектива и области вокруг нее устанавливают проверкой астигматизма и разрешающей способности. Это можно сделать разными способами, но один из самых простых состоит в исследовании образца при достаточно высоком увеличении, позволяющем увидеть очень тонкую структуру фона, которую обычно наблюдают на любой покрытой углеродом подложке. При небольших изменениях фокусировки очень мелкие зернышки напыленного углерода должны выглядеть четкими и одинаково симметричными, а по мере достижения истинного фокуса они должны уменьшаться в размерах и утрачивать контраст. Если зерна начинают выглядеть удлиненными, это означает, что изображение имеет астигматические нарушения и его следует исправить, в особенности если требуются микрофотографии при большом увеличении. Отсутствие четких очертаний зерен при фокусировке, возможно, свидетельствует о загрязнении диафрагмы и/или держателя образца или о нестабильности электронной части прибора. Это так называемое «мягкое» изображение будет еще более «мягким» на фото-
